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上海沪鼎教您处理ELISA试剂盒的六大重点标本
阅读：1400 发布时间：2014-12-5 为什么ELISA方法那么受欢迎？因为其优点多，易操作，能够检测数种标本。然而，能够影响到ELISA实验结果的因素有很多，其中就包括标本的处理。但是不同类型的标本处理方法不同，这也就是今天的重点资料内容了。上?；Χ棠?strong>ELISA试剂盒的六大重点标本：
一、尿液、唾液
1000×g离心20min，取上清即可检测。但由于ELISA只能检测可溶性蛋白的含量，应保证所有样本均为澄清的液体，沉淀或悬浮物都应离心去除。为了保证检测的准确性，保存于-20℃或-80℃的样本在1~6个月内检测；4℃保存的样本应在1周内进行检测。
注意：还应保证样本不含NaN3，因为NaN3会抑制HRP的活性，从而导致假阴性的结果。
二、细胞裂解液
① 吸去培养板内的培养基，用胰酶消化细胞，加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略。
② 收集细胞悬液，1000×g离心10min，弃去培养基，用预冷的PBS润洗3次。
③ 加入适量的预冷PBS或细胞裂解液(临用前加入蛋白酶抑制剂)重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μL PBS重悬。
④ 将样品放入-20℃或-80℃，使样品冷冻，再放室温解冻样品，反复冻融几次，使细胞充分裂解。也可将样品进行超声破碎，以达到裂解的目的。
⑤ 4℃10000×g离心10min，除去细胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
三、细胞培养上清
取细胞培养上清到离心管，1000×g离心20min，除去细胞碎片及杂质，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
四、组织匀浆液
① 将组织样本用PBS(0.01M, PH 7.4)冲洗，洗去组织表面残留的血液或杂质。
② 将组织块称重，记录后剪碎，碎块应尽量小，便于匀浆得更充分
③ 将组织按一定的比例加入预冷的PBS(临用前加入蛋白酶抑制剂)匀浆，匀浆时置于冰上或冰浴中。(通常按组织重量：PBS体积=1:9的比例匀浆)
④ 吸取匀浆液到离心管，4℃5000×g离心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
五、血清
用无热原、无内毒素的试管或离心管采集血液标本，将试管或离心管室温放置2小时或4℃放置一个晚上，使血清析出。(将试管或离心管倾斜放置，使液面横截面增大，能使血清更大程度的析出)4℃1000×g离心20分钟，仔细收集上清。建议将血清分装多份，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
注意：采血过程中应避免溶血，因为红细胞裂解时会释放具有过氧化酶活性的物质，在以HRP为标记的ELISA检测中会有非特异性的显色，而导致检测的不准确性。同时也应避免细菌污染，因为菌体内可能含有内源性的HRP从而导致检测的假阳性。
六、血浆
用含抗凝剂的采血管或离心管采集血液标本，标本采集后30min内4℃ 1000×g离心15min，取上清即血浆。将上清分装多份，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。避免使用溶血或高血脂的标本。
以上就是ELISA实验的六大重点检测标本的处理方法，方法用对了才能够保证实验效果哦！当然啦，操作中还需要您认真对待与足够的耐心。本公司可为您提供ELISA试剂盒免费代检测服务，上海本地还可以上门取样哦！