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沪鼎进口标准品分析制备细菌蛋白质样本，八步骤决定实验结果
阅读：1313 发布时间：2014-4-8 今天为止，就快要算上是本月的三分之一啦，这时间如流水，快得让人顾之不及。然而新的一天中，上?；Χ岱窒硇碌氖笛?，我公司每周都会有的公司动态文章发布，欢迎朋友们关注。下面我们就进入今天的主题，来看进口标准品分析制备细菌蛋白质样本，八步骤决定实验结果
实验中需要用到的物品：
1、表达待检测蛋白质的细菌
2、50mmol/L Tris·Cl (pH7.4)
3、2×SDS凝胶加样缓冲液
100mmol/L Tris·Cl (pH 6.8)
200mmol/L 二硫苏糖醇（DTT）
4% SDS(电泳级)
0.2% 溴酚蓝
20% 甘油
不含有二硫苏糖醇（DTT）的2×SDS凝胶加样缓冲液可保存于室温，临用前须从1mol/L二硫苏糖醇储存液现用现加于上述缓冲液中。
4、台式离心机
5、超声破碎仪
6、水浴箱
7、涡漩振荡器
8、加样器与吸头等
实验八步骤：
1、表达靶蛋白大肠杆菌经诱导适当时间后，用微量离心机以12 000g离心30s，收集1ml培养的菌体；
2、吸取培养液，加入0.5ml用冰预冷的50mmol/L Tris·Cl (pH7.4)，振荡沉淀的菌体，使之复悬，用微量离心机于0℃以12 000g离心30s回收菌体；
3、再次吸出上清液，小心地吸净管壁上的液滴，尽可能使沉淀物不带有残留液体；
4、加入25ul水，振荡使沉淀复悬，一旦菌体分散开来，立即加入25ul 2×SDS凝胶加样缓冲液，继续振荡20s；
5、样品在沸水浴中放置5min；
6、采用带有浸入尖头或能在冷却杯中同时处理多个样品的超声处理仪对DNA进行剪切，根据所用超声处理仪的输出功率及其设定状态，以zui大功率处理0.5~2min应能有效地将裂解液粘度降至可控水平；
7、样品于室温以12 000g离心10min，将上清液移至另一管中，弃沉淀物；
8、吸取经剪切或超声处理的样品25ul电泳，剩余样品保存于–20℃备用。
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