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您看沪鼎培养大鼠胰岛细胞，八步即能完成实验
阅读：1186 发布时间：2014-2-20 这是一项比较热门的实验，如果您需要用到、了解的话可以拿出空余的两分钟时间来阅读下面的文章。我们把本实验的步骤分为了八个部分，下面就来分条说明。
试剂都是有它的配制方法的，这里的实验是培养大鼠胰岛细胞，在我公司中所能看见的大鼠二字也就是试剂盒方面了，其中的种属大鼠是非常热销的。我们在做这个实验的*步就是要将一周龄Wistar大鼠断颈处死，热爱动漫的朋友有没有莫名的想到了兵长呢？然后就要把它放于75%乙醇浸泡15 分钟，无菌取出胰腺，于冰冷无菌D-Hanks’液中漂洗，用眼科剪仔细清除脂肪、包膜、血管等胰外组织，转入青霉素小瓶中。
第二个步骤就是要加入少量无菌D-Hanks’液，用眼科剪剪成0.1-1.0 mm3 大小的碎片，用滴管轻轻吸出上层细小脂肪碎块和油滴，再用无菌D-Hanks’液反复清洗 8~10 次，加入10 倍体积无菌消化酶液[胰蛋白酶-胶原酶消化液：0.05 g 胰蛋白酶，0.025 g Ⅴ型胶原酶(663 U/mg)，0.05 g 葡萄糖，溶于100mL 无Ca2+、Mg2+的0.01 mol/L PBS(pH 值为 7.4)溶液，用0.22 µm 微孔滤膜滤菌]，38℃±1℃消化，消化过程中不断震荡，10 分钟后弃去上清液。
那么多的数字文字看上去有些眼花缭乱啊，其实操作时会发现没有那么麻烦的。
我们第三步要用无菌D-Hanks’液将组织块清洗 2~3 次，加入新鲜酶液继续消化，重复上述步骤，此时组织块边缘模糊。
第四个步骤的时候要将组织块浸入消化酶液中，38℃±1℃消化10 分钟，将消化酶液与组织块分开，组织块重新加入新鲜消化酶液进行消化；而原消化酶液1500 rpm离心 10 分钟，取沉淀即为消化下的细胞，重新用无菌D-Hanks’悬浮，离心，重复 1~2 次，再用培养基洗 2~3 次，用培养基悬浮即得细胞悬液。
实验过程到这里已经说了一半了，为了完成漂亮的实验，您在操作的时候也要注意一些小细节部分
我们第五步的时候，要将消化过的组织块重复消化5~6 次至组织块消化*，重复以上操作。
第六步，合并几次所得细胞悬液，计数，调整细胞浓度为 2×105个细胞/mL，将细胞悬液接种于24 孔塑料培养板中，每孔1 mL，置于37℃，5%CO2，饱和湿度培养箱中培养。
文章看起来前面文字密密麻麻，中间有些松散。这里也能够看出，前面的步骤流程是比较多的，到了中间就会稍微的简单一些，因为步骤上有重复上面的，做过了的再次重复就会简单一点。
到了第七步的时候，由于成纤维细胞贴壁要比胰岛细胞迅速，接种15 h 后，轻轻振荡培养板，将上面未贴壁的细胞接入新的培养板中，可除去部分成纤维细胞。
第八步，将新培养板中细胞培养 48 小时后，换新鲜配置的含有2.5 ng/mL 的碘乙酸的培养基培养5 h，可除去绝大部分成纤维细胞，而胰岛细胞不受伤害，换不含碘乙酸的培养基洗2 次，并换不含碘乙酸的培养基在 37℃、5% CO2，饱和湿度培养箱中培养。
我们要每隔3天换培养液，获得单层胰岛细胞。
您看沪鼎培养大鼠胰岛细胞，八步即能完成实验?？в?，您需要大鼠elisa试剂盒的话现在个订购七折优惠！本实验中我们需要用到的试剂有：
1、D-Hanks’液
2、蛋白酶
3、Ⅴ型胶原酶
4、葡萄糖
5、碘乙酸
欢迎您购买我公司产品，在您实验的过程中，如果遇到了产品以及技术的问题来电即可，我们将为您安排技术人员给您做全程的实验指导。