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小鼠雌二醇（E2）试剂盒的实验原理与操作步骤
阅读：1230 发布时间：2013-12-12 使用我公司的小鼠雌二醇（E2）试剂盒的实验目的是用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本中雌二醇（E2）含量。下面我们来说一说小鼠雌二醇（E2）试剂盒的实验原理与操作步骤。
实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠雌二醇（E2）水平。用纯化的小鼠雌二醇（E2）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入雌二醇（E2），再与HRP 标记的雌二醇（E2）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过*洗涤后加底物TMB显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的雌二醇（E2）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中小鼠雌二醇（E2）浓度。
操作步骤
1、标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀
释。
200pmol/L 5 号标准品150μl 的原倍标准品加入150μl 标准品稀释液
100pmol/L 4 号标准品150μl 的5 号标准品加入150μl 标准品稀释液
50pmol/L 3 号标准品150μl 的4 号标准品加入150μl 标准品稀释液
25pmol/L 2 号标准品150μl 的3 号标准品加入150μl 标准品稀释液
12.5pmol/L 1 号标准品150μl 的2 号标准品加入150μl 标准品稀释液
2、加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，
然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽
量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
4、 配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用
5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此
重复5 次，拍干。
6、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7、温育：操作同3。
8、洗涤：操作同5。
9、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色
15 分钟.
10、终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11、测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后15 分钟以内进行。