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如何科学挑选适用的ELISA试剂盒？实验人必看的避坑指南
阅读：222 发布时间：2025-6-10一、明确检测目标?
1.检测对象是什么？?
明确待测物是细胞因子、激素、病毒抗体还是其他蛋白。不同试剂盒针对的抗原表位和抗体对可能不同。
关键点：查看试剂盒说明书中的“检测范围"和“交叉反应"，确认是否覆盖你的目标物种和异构体（如人/小鼠/大鼠）。
2.需要定量还是定性？?
定量试剂盒需提供标准品和标准曲线，适合精确测量浓度；定性试剂盒（如诊断用）通常只判断阴阳性。
二、匹配样本类型?
不同样本的处理方式可能影响检测结果：
血清/血浆?：需避免溶血、脂血（可能引起非特异性结合）。
细胞培养上清?：注意培养基中是否含高浓度BSA或胎牛血清（可能干扰检测）。
组织裂解液?：需验证裂解缓冲液成分是否与试剂盒兼容（如避免强去垢剂）。
提示：试剂盒说明书会标注已验证的样本类型，若使用特殊样本（如脑脊液、唾液），建议先做预实验验证。
三、选择试剂盒类型
?ELISA有四大常见类型，适用场景不同：
类型 | ?原理 | ?适用场景? |
双抗体夹心法 | 双抗体捕获抗原 | 大分子（如IL-6、TNF-α） |
竞争法 | 双抗体捕获抗原 | 小分子（如皮质醇、药物） |
间接法 | 样品抗原与标记抗原竞争 | 检测抗体（如血清抗体） |
直接法 | 酶标记一抗 | 快速检测，步骤简化 |
优先选择夹心法（灵敏度高、特异性强），但小分子只能选竞争法。
四、评估试剂盒性能?
1.灵敏度与检测限?
灵敏度（最-低检测浓度）和检测范围需覆盖你的样本浓度。例如：检测血清细胞因子时，若样本浓度低，需选择高灵敏度试剂盒（如灵敏度≤1 pg/mL）。
2.批间差与稳定性?
查看厂商是否提供不同批次的CV（变异系数）数据，批间差应<15%。避免因批次差异导致实验重复性差。
3.抗体对来源?
单克隆抗体特异性高但可能识别单一表位；多克隆抗体灵敏度高但需验证交叉反应。建议选择经Western Blot或质谱验证的抗体。
五、验证与优化?
阳性/阴性对照?：试剂盒应提供明确对照，用于判断实验有效性。
回收率实验?：在样本中加入已知浓度标准品，回收率应在80%-120%。
重复性测试?：同一样本重复3次检测，CV值应<10%。
若背景信号过高，可尝试：缩短显色时间、优化封闭液（如使用5%脱脂奶粉）、增加洗涤次数。