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①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。

②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅来进行定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。

ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：

①固相的抗原或抗体

②酶标记的抗原或抗体

③酶作用的底物（显色剂）。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。

基质金属蛋白酶（MMP-3）ELISA 试剂盒

夹心法

夹心法常用于检测大分子抗原，一般的操作步骤为:

1. 将具有专一性的抗体固著（coating）于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体

2. 加入待测检体，检体中若含有待测的抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结

3. 洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一的一次抗体，与待测抗原进行键结

4. 洗去多余未键结一次抗体，加入带有酶的二次抗体，与一次抗体键结

5. 洗去多余未键结二次抗体，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果

基质金属蛋白酶（MMP-3）ELISA 试剂盒

操作程序

1.   分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准品孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品孔中加入标准品50μl；在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。轻轻晃动混匀，37℃温育60分钟。

2.   弃去液体，甩干，每孔加满稀释后洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。如此重复5次，拍干。

3.   每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.

4.   取出酶标板，每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。

5.   测定：以空白孔调零，在450nm波长下测量各孔的吸光度值（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

6.   根据标准品的浓度及对应的OD值计算出标准曲线的直线回归方程，再根据样品的OD值在回归方程上计算出对应的样品浓度。也可以使用各种应用软件来计算。应记住由于样品稀释了的，其实际浓度应该乘以总稀释倍数。