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技术文章
了解一下潮霉素B的应用有哪些吧
点击次数：1349 发布时间：2021-4-23
今天让我们一起来了解一下潮霉素B的应用有哪些吧，话不多说一起看看吧。
1.筛选和维持培养稳定转染Hph 载体的原核细胞或真核细胞(植物细胞和哺乳动物细胞);
2.由于作用模式的差异，常与G418 (GeneticinTM)，Zeocin™和blasticidin S联合使用，筛选稳定转染两个不同载体的细胞株;
3.抗病毒剂，由于潮霉素B选择性渗透进入病毒感染增强通透性的细胞，而且具有抑制翻译的功效;
4.作为驱虫药加入动物饲料;
5.双抗性稳定转染细胞筛选的抗生素作用机制及抗性
6.抗生素抗性机制抗性基因哺乳动物筛选浓度
i.潮霉素B干扰70S核糖体易位和诱导对mRNA模板的错读Hph 200~500μg/mL;
ii.G418干扰80S核糖体功能和抑制蛋白合成Tn5/Tn60 1100~1000μg/mL;
iii.Zeocin掺入或者切割DNA引起细胞死亡Sh ble 50~100μg/mL;
iv.blasticidin S核糖体上抑制肽键形成Bsd/BSD 3~50μg/mL。
1.案例一：杀灭曲线确定最佳杀死浓度(仅作参考)
i.往组织培养级的96孔板内加入未转染细胞，细胞密度约50-200细胞/孔;细胞贴壁之后，往每孔加入含不同浓度(如50-1000μg/mL，至少5个浓度)潮霉素B的200μL新鲜培养基;
ii.37℃，5% CO2培养箱孵育细胞10-14天;
iii.培养5-7天后更换新的培养液，培养液内含有相应浓度的潮霉素B;
iv.10-14天后使用细胞增殖方法如MTT，CCK-8等评估细胞活力;也可以通过检测细胞克隆数或百分比汇合率来确定毒性效应。一般选择在10-14天能够杀死所有细胞的最小浓度为最佳筛选浓度。
2.案例二：筛选稳定转染细胞
i.对于贴壁细胞，直接吸去60mm培养皿内的转染细胞培养基，然后加入含有潮霉素B的新鲜培养基5-6ml;对于悬浮细胞，无菌条件250x g,离心10min除去旧的转染细胞培养基，然后悬浮在约5ml的含潮霉素B的新鲜培养基;
ii.5-7天后，如上方法更换含有潮霉素B的新鲜培养基;
iii.再孵育细胞5-7天;
iv.10-14天孵育后，培养体系中只含有能够表达潮霉素B抗性表型的活细胞。因此筛选之后如步骤