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| 供货周期 | 一周 | 应用领域 | 生物产业 |
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植物RNA核酸免提取试剂盒
试剂盒应用
本试剂盒采用专门针对植物样本特性的裂解液P在10分钟内完成植物叶片、根、茎、花蕊、种子等的裂解、提取和纯化。提取对象包括水稻、玉米、小麦、油菜等作物。整个提取无需使用蛋白酶K和β-巯基乙醇。该配方中含有RNA?；ぜ?，能够抑制RNA降解、?；?/span>RNA完整，从而提高产量。提取RNA可用于RT-PCR、RT-qPCR、Northern Blot、分子克隆、文库构建等。
本试剂盒仅供研究使用，不可用于临床、食品、化妆品等领域。
试剂盒组成
组分 | Col-R0201（50T） | 编号 |
裂解液P | 35 mL | Col-R0201A |
洗涤液WA | 25 mL | Col-R0201B |
洗涤液WB | 12 mL | Col-R0201C |
洗脱液P | 5 mL | |
RNA吸附柱 | 50套 | Col-R0201E |
备注：第一次使用前，在洗涤液WB中加入48mL无水乙醇，并标记“√"和时间，避免重复加入。
保存条件
室温保存一年。
自备材料
水浴锅或金属浴、无水乙醇、1.5mL无RNase离心管、DNase I（2U/μL，或货号QR0102）
使用方法
1. 20-100mg新鲜植物样本经过液氮研磨后，加入700μL裂解液P，涡旋30秒。
2. 55℃孵育1分钟。
备注：淀粉含量高，例如马铃薯等直接进行步骤3。
3. 12,000rpm离心1分钟，吸取500μL上清液。
4. 加入250μL无水乙醇，上下颠倒混匀。
5. 全部加入RNA吸附柱中，12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中废液。
6. 向RNA吸附柱中加入500μL洗涤液WA，12,000rpm离心30秒，倒掉收集管中废液。
7. 向RNA吸附柱中加入500μL洗涤液WB，12,000rpm离心30秒，倒掉收集管中废液。
8. 重复步骤7一次。
9. 12,000rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。
10. 将RNA吸附柱放入新1.5mL无RNase离心管，加入30-50μL 洗脱液P，室温放置1分钟。
11. 12,000rpm离心2分钟，得到RNA溶液，-80℃保存。
注意事项
1. 务必在超净台中进行操作，常换手套，防止RNA降解。
2. 尽可能使用新鲜样本进行RNA提取。
3. 使用无DNase无RNase的吸头和离心管，防止RNA降解，常更换吸头，防止交叉污染。
4. 为了提高洗脱效率，可提前将洗脱液P置于65℃水浴后再使用。
5. 根据后续试验需求，请使用DNase I（货号QR0102）进行基因组清除。
常见问题解析
问题 | 可能原因 | 推荐解决方案 |
RNA吸附柱 堵塞 | （1）上样量太高 （2）加入RNA吸附柱的液体中有固体成分或沉淀物 | （1）减少上样量。 （2）增加离心时间。 （3）切勿吸取到可见固体成分。 （4）再次离心。 |
RNA得率低 | （1）未离心下来 （2）样本量太大，裂解不充分 | （1）减少样本量。 （2）重复洗脱步骤一次。 |
RNA降解 | （1）样本不新鲜 （2）RNA酶污染 | （1）使用新鲜样本。 （2）使用保存在样品保存液中样本。 （3）样本保存在-80℃甚至液氮中，尽可能现取现用。 （4）常更换手套。 （5）常更换吸头和离心管。 （6）使用无DNase无RNase的吸头和离心管。 |
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