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| 供货周期 | 一周 | 应用领域 | 生物产业 |
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血液RNA核酸免提取试剂盒
试剂盒应用
本试剂盒采用特殊裂解液B从新鲜全血、抗凝血、血凝块中提取并纯化RNA。整个过程仅需要10分钟。采用硅基材质吸附柱，高效专一吸附RNA，保证提取高纯度、高产量RNA。该裂解液配方中含有RNA保护剂，能够抑制RNA降解、保护RNA完整，从而提高RNA产量。提取RNA可用于RT-PCR、RT-qPCR、Northern Blot、分子克隆、文库构建等。
本试剂盒仅供研究使用，不可用于临床、食品、化妆品等领域。
试剂盒组成
组分 | Col-R0301（50T） | 编号 |
裂解液B | 35 mL | Col-R0301A |
洗涤液BW1 | 25 mL | Col-R0301B |
洗涤液BW2 | 12 mL | Col-R0301C |
洗脱液B | 5 mL | |
RNA吸附柱 | 50套 | Col-R0301E |
备注：1、第一次使用前，在洗涤液BW2中加入48mL无水乙醇，并标记“√"和时间，避免重复加入。
保存条件
室温保存一年。
自备材料
水浴锅或金属浴、无水乙醇、1.5mL无RNase离心管、蛋白酶K（20mg/mL，或货号QR0301）、DNase I（2U/μL，或货号QR0102）
使用方法
1. 300μL血液（不足300μL，无菌PBS补齐）中加入500μL裂解液B和10μL蛋白酶K，颠倒混匀。
2. 55℃孵育2分钟。
备注：如果RNA提取量比较低，可延长孵育时间到10分钟。
3. 12,000rpm离心30秒。取750μL上清。
4. 加入0.5倍体积无水乙醇，上下颠倒混匀，
5. 全部加入RNA吸附柱中，12,000rpm离心30秒，倒掉收集管中废液。
6. 向RNA吸附柱中加入500μL洗涤液BW1，12,000rpm离心30秒，倒掉收集管中废液。
7. 向RNA吸附柱中加入500μL洗涤液BW2，12,000rpm离心30秒，倒掉收集管中废液。
8. 重复步骤7一次。
9. 12,000rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。
10. 将RNA吸附柱放入新1.5mL无RNase离心管中，加入30-50μL洗脱液B，室温放置1分钟。
11. 12,000rpm离心2分钟，得到RNA溶液，-80℃保存。
注意事项
1. 务必在超净台中进行操作，?；皇痔?，防止RNA降解。
2. 尽可能使用新鲜样本进行RNA提取。
3. 使用无DNase无RNase的吸头和离心管，防止RNA降解，常更换吸头，防止交叉污染。
4. 为了提高洗脱效率，可提前将洗脱液B置于65℃水浴后再使用。
5. 根据后续试验需求，请使用DNase I（货号QR0102）进行基因组清除。
常见问题解析
问题 | 可能原因 | 推荐解决方案 |
RNA吸附柱 堵塞 | （1）上样量太高 （2）加入RNA吸附柱的液体中有固体成分或沉淀物 | （1）减少上样量。 （2）增加离心时间。 （3）切勿吸取到可见固体成分。 （4）再次离心。 |
RNA得率低 | （1）未离心下来 （2）样本量太大，裂解不充分 | （1）减少样本量。 （2）重复洗脱步骤一次。 |
RNA降解 | （1）样本不新鲜 （2）RNA酶污染 | （1）使用新鲜样本。 （2）使用保存在样品保存液中样本。 （3）样本保存在-80℃甚至液氮中，尽可能现取现用。 （4）常更换手套。 （5）常更换吸头和离心管。 （6）使用无DNase无RNase的吸头和离心管。 |
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