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标签： T4 DNA 聚合酶
T4 DNA 聚合酶具依赖人为模板的聚合酶活性，同时具有对单链、双链DNA的3’到5’端的外切酶活性，缺少5’到3’端的外切酶活性。
实验方法
- T4 DNA聚合酶
| 实验材料 | DNA |
|---|---|
| 试剂、试剂盒 | Trish·Cl dNTP MgCl2 BSA DTT |
| 仪器、耗材 | 水浴锅 |
| 实验步骤 | 一、50 μl 反应体积：
二、dNTp浓度的效应
1. 高浓度的dNTP在通常实验下可以增加聚合酶活性对外切酶活性的比值。
三、度的效应
用T4 DNA聚合酶标记3’末端时，反应温度保持在11℃，在较髙温度下，其外切酶活性易降解DNA模板。 收起 |
| 其他 | 一、缓冲系统的相容性
许多限制性内切酶能在T4 DNA聚合酶的缓冲系统进行切割反应，同时，T4 DNA 聚合酶也能直接使用。 二、应用
1. 放射性标记DNA段的3’末端，含5’凸出端的DNA段及浓度为1~2 μmol/l 的适当［α-32P］dNTP，在11℃温育20 min。
2. 选择性及无选择标记线性化双链DNA分子的3’宋端，即所谓的“置换合成”。双链 DNA段在dNTP存在下与T4 聚合酶温育，其3’末瑞的外切酶活性导致从 3’末端降解DNA，当补加4种dNTP后，可激活其聚合酶活性，延伸DNA镆板的3’末端。在T4 DNA聚合酶的外切酶活性降解了30~40%外模板时加入4种dNTP混合液，可获得zui隹标记效果。 |
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