联系电话
上海北诺生物科技有限公司
中级会员·14年
- 联系人：
- 周经理 刘经理
- 电话：
- 021-57730393
- 手机：
- 15800960770
- 传真：
- 86-021-61496710
- 地址：
- 上海市徐汇区宜山路520号中华门大厦18楼D座
- 个性化：
- www.bnbiotech.com
扫一扫访问手机商铺
[实验原理]
根据决定某等位基因的碱基性质，设计3′端*个碱基分别与各等位基因的特异性碱基相匹配的序列特异性引物，在PCR反应过程中，只有引物3′端*个碱基与决定特定等位基因的碱基互补时才能实现DNA 片段的*复制，根据PCR 产物的有无进行等位基因的分型。
[实验器材]
PCR 扩增仪、电泳仪、电泳槽。
[实验试剂]
引物1：5′-GCATCAAGTACCACTGGT-3′；引物2：5′-GCATTAAGTACCACTGAG-3′；共通引物：5′-GAGAAGTTGAGAAAGGGGT-3′。模板DNA、Taq 聚合酶、丙烯酰胺、电极缓冲液、上样缓冲液等
[实验方法]
1.PCR扩增PCR反应体系为20μl（2个体系，分别为引物1和引物2），含模板2μl（约50ng），引物各1.5μl,dNTP1.6μl（0.4mM），10×Buffer缓冲液2μl，Taq酶1.0U，加双蒸水至20.0μl；PCR反应条件为94℃4min,94℃1.5min/52℃2.0min/72℃2.0min，30个循环。
2.PCR 扩增产物的检测 取PCR扩增产物2μl，6%聚丙烯酰胺凝胶电泳（T=6%，C=3.3%，凝胶规格为82mm×64mm×0.75mm）。电极缓冲液为1×TBE。将加有1/5体积上样缓冲液的酶切产物电泳，220 v 电压，电泳2－3h。银染显色
[结果判定]
根据电泳谱带的有无判定等位基因型别，仅有1 个体系检测到谱带者为相应特异性引物对应型（M 或N），2 个体系均检测到谱带者为MN 型。
[实验讨论]
1.注意事项 ①如引物结合序列存在碱基变异可能无扩增产物，导致错误判型；②在对照样品分型准确的基础上才能判定结果。
