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菌落PCR
标签： 菌落 PCR
菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因组DNA，不必酶切鉴定，而是直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增，省时少力。建议使用载体上的通用引物。通常利用此方法进行重组体的筛选或者DNA测序分析。zui后的PCR产物大小是载体通用引物之间的插入片断大小。
实验方法
- 基本方案
| 实验方法原理 | 直接挑取菌落进行PCR，PCR的95℃加热可以破胞，释放基因组DNA或质粒，成为PCR体系的模板，然后进行链式扩增。 |
|---|---|
| 实验材料 | 基因样品 |
| 试剂、试剂盒 | dNTP PCR混合液 |
| 仪器、耗材 | PCR仪 |
| 实验步骤 | 1. PCR混合液的制备
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| 注意事项 | 1. 设计引物很关键。一般如果是定向克隆，用载体上的通用引物即可；如pET系列可用T7通用引物。如果是非定向克隆（如单酶切或平末端连接），一条引物用载体，一条引物用目的基因上的，这样就可以比较方便的鉴定了，而且错误概率很低。PCR条件的选择接近*，同时挑取的菌体不宜太多，否则会有非特异性扩增。
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