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流式細胞儀的調(diào)試和校準

2017-12-7  閱讀(3914)

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流式細胞儀是一種常用的流量測量儀器,可以快速測量、存貯、顯示懸浮在液體中的分散細胞的一系列重要的生物物理、生物化學方面的特征參量。今天我們主要來介紹一下流式細胞儀的調(diào)試和校準方法,希望可以幫助用戶更好的應(yīng)用產(chǎn)品。

流式細胞儀的調(diào)試和校準

流式細胞儀在使用前,甚至在使用過程中都要精心進行調(diào)試,以保證工作的可靠性和*性。調(diào)試的項目主要是激光強度、液流速度和測量區(qū)的光路等。

激光強度:除調(diào)整反射鏡的角度以調(diào)整到所需波長的激光出光外,還要結(jié)合顯示屏上的光譜曲線使激光的強度輸出為zui大。

液流速度:可通過操作臺數(shù)字顯示監(jiān)督,調(diào)節(jié) 氣體壓力大小以獲得穩(wěn)定的液流速度。

測量區(qū)光路調(diào)節(jié)?。哼@是調(diào)試工作的關(guān)鍵。需要保證在測量區(qū)的液流、激光束、90散射測量光電系統(tǒng)垂直正交,而且交點較小。一般可在用標準熒光微球等校準中完成。

流式細胞術(shù)中所測得的量是相對值,因此需要在使用前或使用中對系統(tǒng)進行校準或標定,這樣才能通過相對測量獲得的意義。因而FCM中的校準具有雙重功能:儀器的準直調(diào)整和定量標度。標準樣品應(yīng)該穩(wěn)定,有形成份形狀應(yīng)是大小比較一致球形,樣品分散性能良好,且經(jīng)濟、容易獲得。常用標準熒光微球作為非生物學標準樣品,雞血紅細胞做為生物學標準樣品。微球用樹脂材料制作,或標有熒光素,或不標記熒光素。所用的雞血紅細胞標準樣品制作過程昭下:取3.8%枸櫞酸或肝素抗凝的雞血(抗凝劑:雞血=1:4),經(jīng)PBS清洗3次,再用5~10ml的1.0%戊二醛與清洗后的雞紅細胞混合,室溫下振蕩醛化24h,zui后經(jīng)PBS再清洗,貯4℃冰箱中備用。需要指出的是因為未經(jīng)熒光染色,所測光信號為雞血紅蛋白的自發(fā)熒光。

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