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地址:北京市海淀區(qū)馬連洼北路128號百草園3號樓2單元503
郵編:100193
聯(lián)系人:江經(jīng)理
電話:86-10-62817090
傳真:86-10-62817090
手機(jī):18911522826,18001252729
留言:發(fā)送留言
個(gè)性化:www.bjnobleryder.com
網(wǎng)址:
商鋪:http://www.mtfinger.com/st236942/
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供求商機(jī)
SDS裂解液
【產(chǎn)品簡介】
本公司供應(yīng)化學(xué)試劑的SDS裂解液,*,歡迎洽談。
【詳細(xì)說明】
SDS裂解液
本公司供應(yīng)化學(xué)試劑的SDS裂解液,*,歡迎洽談。
們生產(chǎn)的SDS裂解液(SDS Lysis Buffer)是一種比較強(qiáng)烈的細(xì)胞組織裂解液。SDS裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的Western、ChIP(染色質(zhì)免疫共沉淀,chromatin immunoprecipitation)等。
關(guān)于我們生產(chǎn)的不同的裂解液的主要特點(diǎn)和差異,以及如何選擇裂解液可參考附錄。
SDS裂解液的主要成分為50mM Tris(pH8.1),1% SDS,以及2mM sodium pyrophosphate,25mM β-glycerophosphate,1mM EDTA,1mM Na3VO4,0.5 ug/ml leupeptin等多種抑制劑。可以有效抑制蛋白降解。
用SDS裂解液裂解得到的蛋白樣品,可以用我們生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
關(guān)于我們生產(chǎn)的不同的裂解液的主要特點(diǎn)和差異,以及如何選擇裂解液可參考附錄。
SDS裂解液的主要成分為50mM Tris(pH8.1),1% SDS,以及2mM sodium pyrophosphate,25mM β-glycerophosphate,1mM EDTA,1mM Na3VO4,0.5 ug/ml leupeptin等多種抑制劑。可以有效抑制蛋白降解。
用SDS裂解液裂解得到的蛋白樣品,可以用我們生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
使用說明:
對于培養(yǎng)細(xì)胞樣品:
1. 融解SDS裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,使PMSF的zui終濃度為1mM。
2. 對于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150--250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后,細(xì)胞就會(huì)被裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續(xù)裂解10分鐘。
對于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成50-100萬細(xì)胞/管,然后再裂解。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續(xù)裂解10分鐘。
3. 充分裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和ChIP等操作。
裂解液用量說明:通常6孔板每孔細(xì)胞加入150微升裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200微升或250微升。如果用于ChIP,建議6孔板每孔細(xì)胞至少加入200微升裂解液。
對于組織樣品:
1. 把組織剪切成細(xì)小的碎片。
2. 融解SDS裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,使PMSF的zui終濃度為1mM。
3. 按照每20毫克組織加入150--250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)
4. 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續(xù)裂解10分鐘。
5. 充分裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和ChIP等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便,不必使用勻漿器,缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
用于普通的Western、IP或co-IP,我們推薦使用Western及IP細(xì)胞裂解液(P1001),該裂解液已被國內(nèi)各大研究機(jī)構(gòu)廣泛使用,用戶普遍反映很好。裂解細(xì)胞或組織后,沒有非常粘滯的透明狀DNA團(tuán)塊形成,不必采用超聲處理等就可以非常理想地用于后續(xù)操作。另外該裂解液裂解的產(chǎn)物也適合用于磷酸化蛋白的Western檢測。
對于某些特殊蛋白的IP,如果發(fā)現(xiàn)Western及IP細(xì)胞裂解液(P1001)效果不是非常理想,可以嘗試用RIPA裂解液(強(qiáng)、中或弱)或NP-40裂解液。如果發(fā)現(xiàn)IP的時(shí)候背景很高,即非特異的蛋白也被IP下來,則需要選用裂解強(qiáng)度較高的裂解液,例如RIPA裂解液(強(qiáng)或中)。如果發(fā)現(xiàn)目的蛋白無法被IP下來,則說明裂解液的強(qiáng)度過強(qiáng),可以使用較為溫和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。
對于某些難溶解蛋白的Western,如果發(fā)現(xiàn)Western及IP細(xì)胞裂解液(P1001)效果不是非常理想,可以嘗試使用裂解強(qiáng)度更高的裂解液例如RIPA裂解液(強(qiáng)、中)或SDS裂解液。
對于培養(yǎng)細(xì)胞樣品:
1. 融解SDS裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,使PMSF的zui終濃度為1mM。
2. 對于貼壁細(xì)胞:去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150--250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細(xì)胞充分接觸。通常裂解液接觸細(xì)胞1-2秒后,細(xì)胞就會(huì)被裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續(xù)裂解10分鐘。
對于懸浮細(xì)胞:離心收集細(xì)胞,用手指把細(xì)胞用力彈散。按照6孔板每孔細(xì)胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞。如果細(xì)胞量較多,必需分裝成50-100萬細(xì)胞/管,然后再裂解。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續(xù)裂解10分鐘。
3. 充分裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和ChIP等操作。
裂解液用量說明:通常6孔板每孔細(xì)胞加入150微升裂解液已經(jīng)足夠,但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200微升或250微升。如果用于ChIP,建議6孔板每孔細(xì)胞至少加入200微升裂解液。
對于組織樣品:
1. 把組織剪切成細(xì)小的碎片。
2. 融解SDS裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,使PMSF的zui終濃度為1mM。
3. 按照每20毫克組織加入150--250微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量。)
4. 用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。如果用于ChIP,初步裂解后需在冰浴上繼續(xù)裂解10分鐘。
5. 充分裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和ChIP等操作。
6. 如果組織樣品本身非常細(xì)小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強(qiáng)烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便,不必使用勻漿器,缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
用于普通的Western、IP或co-IP,我們推薦使用Western及IP細(xì)胞裂解液(P1001),該裂解液已被國內(nèi)各大研究機(jī)構(gòu)廣泛使用,用戶普遍反映很好。裂解細(xì)胞或組織后,沒有非常粘滯的透明狀DNA團(tuán)塊形成,不必采用超聲處理等就可以非常理想地用于后續(xù)操作。另外該裂解液裂解的產(chǎn)物也適合用于磷酸化蛋白的Western檢測。
對于某些特殊蛋白的IP,如果發(fā)現(xiàn)Western及IP細(xì)胞裂解液(P1001)效果不是非常理想,可以嘗試用RIPA裂解液(強(qiáng)、中或弱)或NP-40裂解液。如果發(fā)現(xiàn)IP的時(shí)候背景很高,即非特異的蛋白也被IP下來,則需要選用裂解強(qiáng)度較高的裂解液,例如RIPA裂解液(強(qiáng)或中)。如果發(fā)現(xiàn)目的蛋白無法被IP下來,則說明裂解液的強(qiáng)度過強(qiáng),可以使用較為溫和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。
對于某些難溶解蛋白的Western,如果發(fā)現(xiàn)Western及IP細(xì)胞裂解液(P1001)效果不是非常理想,可以嘗試使用裂解強(qiáng)度更高的裂解液例如RIPA裂解液(強(qiáng)、中)或SDS裂解液。
保存條件:
-20℃保存,一年有效。
注意事項(xiàng):
為取得*的使用效果,盡量避免過多的反復(fù)凍融??梢赃m當(dāng)分裝后使用。
裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。
關(guān)于裂解液的選擇,一方面可以參考我們生產(chǎn)的各種裂解液主要特點(diǎn)、差異,選擇合適的裂解液;另一方面也需要通過一些預(yù)實(shí)驗(yàn)來摸索*的適合您實(shí)驗(yàn)條件的裂解液。
為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
-20℃保存,一年有效。
注意事項(xiàng):
為取得*的使用效果,盡量避免過多的反復(fù)凍融??梢赃m當(dāng)分裝后使用。
裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。
關(guān)于裂解液的選擇,一方面可以參考我們生產(chǎn)的各種裂解液主要特點(diǎn)、差異,選擇合適的裂解液;另一方面也需要通過一些預(yù)實(shí)驗(yàn)來摸索*的適合您實(shí)驗(yàn)條件的裂解液。
為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 品牌 | 規(guī)格 | 價(jià)格(元) |
P0910 | NP-40裂解液 | NobleRyder | 100ml | 220.00 |
P0160 | PMSF(100mM) | NobleRyder | 1/10ml | 30.00/100.00 |
P0902 | RIPA裂解液(強(qiáng)) | NobleRyder | 100ml | 220.00 |
P0908 | RIPA裂解液(強(qiáng)中弱套裝) | NobleRyder | 3*50ml | 280.00 |
P0906 | RIPA裂解液(弱) | NobleRyder | 100ml | 220.00 |
P0904 | RIPA裂解液(中) | NobleRyder | 100ml | 220.00 |
P0912 | SDS裂解液 | NobleRyder | 100ml | 220.00 |
P0907 | Western及IP細(xì)胞裂解液 | NobleRyder | 100ml | 220.00 |
P0916 | 非變性細(xì)胞裂解緩沖液 | NobleRyder | 100ml | 220.00 |
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