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北京諾博萊德科技有限公司

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供求商機

RIPA裂解液(強)

  • 發(fā)布日期:
  • 有效日期:
  • 所 在 地:
  • 產(chǎn)  地:
  • 已獲點擊:

  • 2025年3月12日
  • 2025年9月12日
  • 北京北京市
  • 303次

【產(chǎn)品簡介】

本公司供應(yīng)化學(xué)試劑的RIPA裂解液(強),*,歡迎洽談。


【詳細說明】

 

RIPA裂解液
本公司供應(yīng)化學(xué)試劑的RIPA裂解液,*,歡迎洽談。
我們生產(chǎn)的RIPA裂解液(RIPA Lysis Buffer)是一種傳統(tǒng)的細胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規(guī)的WesternIP等。
RIPA
的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多種,根據(jù)其裂解液的強度大致可以分為強、中、弱三類。關(guān)于不同的RIPA裂解液以及我們生產(chǎn)的其它裂解液的主要特點和差異,以及如何選擇裂解液可參考附錄。
RIPA
裂解液的主要成分為50mM Tris(pH 7.4),150mM NaCl,1% Triton X-100,1% sodium deoxycholate0.1% SDS,以及2mM sodium pyrophosphate25mM β-glycerophosphate,1mM EDTA,1mM Na3VO4,0.5 ug/ml leupeptin等多種抑制劑??梢杂行б种频鞍捉到狻?/span>
RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品,可以用我們生產(chǎn)的BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的去垢劑,不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。
使用說明:
對于培養(yǎng)細胞樣品:
1.
融解RIPA裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,使PMSF的zui終濃度為1mM。
2.
對于貼壁細胞:去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不洗。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后,細胞就會被裂解。
對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成50-100萬細胞/管,然后再裂解。
3.
充分裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
裂解液用量說明:通常6孔板每孔細胞加入150微升裂解液已經(jīng)足夠,但如果細胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到200微升或250微升。
對于組織樣品:
1.
把組織剪切成細小的碎片。
2.
融解RIPA裂解液,混勻。取適當(dāng)量的裂解液,在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入PMSF,使PMSF的zui終濃度為1mM。
3.
按照每20毫克組織加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液,如果需要高濃度的蛋白樣品,可以適當(dāng)減少裂解液的用量。
4.
用玻璃勻漿器勻漿,直至充分裂解。
5.
充分裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續(xù)的PAGEWestern和免疫沉淀等操作。
6.
如果組織樣品本身非常細小,可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解,通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清,用于后續(xù)實驗。直接裂解的優(yōu)點是比較方便,不必使用勻漿器,缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。
注:RIPA裂解液的裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團透明膠狀物,屬正?,F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組
DNA
等的復(fù)合物。在不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下,可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗;如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白,則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物,隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子,例如NFκB、p53等時,通常不必進行超聲處理,就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。

用于普通的WesternIPco-IP,我們推薦使用WesternIP細胞裂解液(P1001),該裂解液已被國內(nèi)各大研究機構(gòu)廣泛使用,用戶普遍反映很好。裂解細胞或組織后,沒有非常粘滯的透明狀DNA團塊形成,不必采用超聲處理等就可以非常理想地用于后續(xù)操作。另外該裂解液裂解的產(chǎn)物也適合用于磷酸化蛋白的Western檢測。
對于某些特殊蛋白的IP,如果發(fā)現(xiàn)WesternIP細胞裂解液(P1001)效果不是非常理想,可以嘗試用RIPA裂解液強、中或弱NP-40裂解液。如果發(fā)現(xiàn)IP的時候背景很高,即非特異的蛋白也被IP下來,則需要選用裂解強度較高的裂解液,例如RIPA裂解液強或中。如果發(fā)現(xiàn)目的蛋白無法被IP下來,則說明裂解液的強度過強,可以使用較為溫和的裂解液例如RIPA裂解液NP-40裂解液。
對于某些難溶解蛋白的Western,如果發(fā)現(xiàn)WesternIP細胞裂解液(P1001)效果不是非常理想,可以嘗試使用裂解強度更高的裂解液例如RIPA裂解液強、中SDS裂解液。
保存條件:
-20℃保存,一年有效。
注意事項:
為取得*的使用效果,盡量避免過多的反復(fù)凍融??梢赃m當(dāng)分裝后使用。
裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行。
關(guān)于裂解液的選擇,一方面可以參考我們生產(chǎn)的各種裂解液主要特點、差異,選擇合適的裂解液;另一方面也需要通過一些預(yù)實驗來摸索*的適合您實驗條件的裂解液。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

貨號
產(chǎn)品名稱
品牌
規(guī)格
價格(元)
P0910
NP-40裂解液
NobleRyder
100ml
220.00
P0160
PMSF(100mM)
NobleRyder
1/10ml
30.00/100.00
P0902
RIPA裂解液(強)
NobleRyder
100ml
220.00
P0908
RIPA裂解液(強中弱套裝)
NobleRyder
3*50ml
280.00
P0906
RIPA裂解液(弱)
NobleRyder
100ml
220.00
P0904
RIPA裂解液(中)
NobleRyder
100ml
220.00
P0912
SDS裂解液
NobleRyder
100ml
220.00
P0907
Western及IP細胞裂解液
NobleRyder
100ml
220.00
P0916
非變性細胞裂解緩沖液
NobleRyder
100ml
220.00

    
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