2x Universal Probe qPCR Mix

2 x Universal Probe qPCR Mix 熒光定量

目錄號：71319

產(chǎn)品內(nèi)容

保存條件

-20℃保存，有效期24個月。使用前，充分融解，輕輕顛倒混勻，短期使用可放在 4 ℃，避免反復(fù)凍融。

產(chǎn)品簡介

2x Universal Probe qPCR Mix是探針法專用的qPCR試劑，為2x 預(yù)混液，包含除引物和DNA樣品以外的所有qPCR組分，可減少操作步驟，縮短加樣時間，降低污染幾率。

其核心組分是全新的Hotmaster Taq DNA聚合酶，配合精心優(yōu)化的Buffer體系，有效抑制非特異性擴(kuò)增，可對寬廣濃度范圍的模板進(jìn)行準(zhǔn)確定量，獲得穩(wěn)定可靠的qPCR結(jié)果，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)。適用于DNA或cDNA的靶序列檢測、基因表達(dá)分析、拷貝數(shù)分析、SNP分型等。

預(yù)混液中已添加有通用型ROX，適用于各種qPCR儀，使用時不需要額外添加ROX來校正儀器。

操作步驟：

1. 將DNA模板、引物、探針、2 x Universal Probe qPCR Mix、RNase-Free H2O溶解并置于冰上備用。

2. 冰上配制qPCR反應(yīng)體系：（以20μl反應(yīng)體系為例）

1） 推薦模板加樣量為1-2μl / 20μl反應(yīng)體系，cDNA原液≤總反應(yīng)體系的10%，基因組DNA的量為10-100 ng。因不同種類的DNA模板中含有的靶基因拷貝數(shù)不同，可對模板進(jìn)行梯度稀釋，以確定最佳的模板使用量。

2） 通常引物濃度為0.25 μM，就可以得到較好的結(jié)果，反應(yīng)效果不佳時可在0.1 - 1.0 μM范圍內(nèi)進(jìn)行調(diào)整。擴(kuò)增效率不高的情況下，可提高引物濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系。

3. qPCR反應(yīng)程序

注意：

1） 本產(chǎn)品兼容性強(qiáng)，絕大多數(shù)情況下使用二步法和三步法均可獲得良好效果。一般來說，二步法擴(kuò)增特異性高，三步法擴(kuò)增效率高。如果融鏈曲線較差，可以嘗試兩步法擴(kuò)增或提高退火溫度；如果因使用Tm值較低的引物等原因，得不到良好的實驗結(jié)果時，可嘗試加長延伸時間或者進(jìn)行三步法PCR擴(kuò)增。

2） 根據(jù)引物的Tm值進(jìn)行退火&延伸（退火）溫度的設(shè)定；

3） 延伸（退火&延伸）時間的設(shè)置還需要根據(jù)您所使用的qPCR儀所需要的最短數(shù)據(jù)采集時間自行調(diào)整。

4） 融解曲線分析請以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進(jìn)行設(shè)定。

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