KOD DNA Polymerase 是從克隆有Thermococcus Kodakaraensis DNA聚合酶基因的質(zhì)粒在大腸桿菌中經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)分離純化而來(lái)。該酶所具有的chao強(qiáng)3’→ 5’外切酶活性使得其保真性比Pfu DNA Polymerase 更高
KOD DNA Polymerase(含超純dNTP) PCR相關(guān)

KOD DNA Polymerase (含超純 dNTP)

 

KOD DNA Polymerase(含超純dNTP) PCR相關(guān)

目錄號(hào):71516

產(chǎn)品內(nèi)容

保存條件

-20℃保存，有效期 2 年。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

KOD DNA Polymerase 是從克隆有Thermococcus Kodakaraensis DNA聚合酶基因的質(zhì)粒在大腸桿菌中經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)分離純化而來(lái)。該酶所具有的chao強(qiáng)3’→ 5’外切酶活性使得其保真性比Pfu DNA Polymerase 更高，保真性是Taq DNA Polymerase的80倍，同時(shí)具有合成速度快的特點(diǎn)，聚合速度約為普通Pfu DNA Polymerase的5倍，Taq DNA Polymerase的2倍，達(dá)到100-138bp/秒，可以在短時(shí)間內(nèi)獲得高產(chǎn)量的擴(kuò)增產(chǎn)物，特別適合于高保真地?cái)U(kuò)增6kb以內(nèi)的PCR 產(chǎn)物，擴(kuò)增所得的DNA為平末端，可直接用于Blunt (平末端)載體克隆（Cat#V116、V117），也可用于基因克隆、表達(dá)及突變分析等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

活性單位:

KOD DNA Polymerase 活性定義為在 75°C 活性測(cè)定條件下，在 30 min內(nèi)攝入 10nmoles 的 dNTPs 使成為酸性不溶物時(shí)所需要酶的活性定義為1U。

質(zhì)量控制:

SDS-PAGE 檢測(cè)純度大于 99%，經(jīng)檢測(cè)無(wú)外源核酸酶活性；PCR 方法檢測(cè)無(wú)宿主殘余 DNA，能有效地?cái)U(kuò)增人基因組中的單拷貝基因；室溫存放一周，無(wú)明顯活性改變。

適用范圍：

用于DNA的高保真擴(kuò)增，如基因表達(dá)克隆、基因定點(diǎn)突變、細(xì)胞內(nèi)基因點(diǎn)突變分析（SNP）和平末端補(bǔ)平等。

注意事項(xiàng)：

高保真KOD對(duì)于dNTP純度要求很高，因此建議用本酶配套的超純dNTP mix。

KOD DNA Polymerase的使用說(shuō)明：

一、配制 PCR 反應(yīng)體系：(于冰上配制)

參考模板用量（50 μl 反應(yīng)體系）：

質(zhì)粒：5-20 ng；細(xì)菌基因組：10-100 ng；人類基因組：50-100 ng；cDNA：1-2 μl 。

注意：用 ddH2O 補(bǔ)足反應(yīng)體系（體積）至 50 μl。實(shí)際操作中，首先要計(jì)算好需要補(bǔ)加ddH2O 的量以后，建議先加水，然后按上述順序添加其它成分，最后添加 KOD DNA Polymerase。充分混勻后，離心數(shù)秒使反應(yīng)混合物沉到管底，然后將反應(yīng)管置于 PCR 儀中進(jìn)行擴(kuò)增。

二、設(shè)置 PCR 循環(huán)條件：（請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)調(diào)整）

注意：一般情況下，Annealing Temperature = Tm - 5°C

如果擴(kuò)增片段小于 4 kb，建議 KOD 酶的延伸速度為 1kb / 15 sec；

如果擴(kuò)增片段大于 4 kb，建議延伸速度為 1kb / 20-30 sec。

三、結(jié)果檢測(cè)：反應(yīng)結(jié)束后取 5 µl 反應(yīng)產(chǎn)物，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

KOD DNA Polymerase(含超純dNTP) PCR相關(guān)