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分離試劑明膠-瓊脂糖凝膠 4FF C20H25N3O 現(xiàn)貨

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  • 北京諾博萊德科技有限公司
  • 2024-09-02 07:23:17
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【簡單介紹】

品牌 其他品牌 貨號 NR6010
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明膠-瓊脂糖凝膠 4FF C20H25N3O 現(xiàn)貨
明膠-瓊脂糖凝膠 4FF 是采用溴化氰法將明膠耦合到瓊脂糖凝膠 4FF 基質(zhì)上的一種親和層析填 料。明膠是一種高分子糖蛋白,在多種細胞的表面和許多細胞外液(包括血漿)中都發(fā)現(xiàn)了明膠的 存在,它可以特異性的結(jié)合纖維連接蛋白。明膠瓊脂糖凝膠 4FF 是專為純化或除去纖維連接蛋白的 一種親和層析填料。

【詳細說明】

明膠-瓊脂糖凝膠4FF:分離試劑,層析介質(zhì)。

明膠-瓊脂糖凝膠 4FF 是采用溴化氰法將明膠耦合到瓊脂糖凝膠 4FF 基質(zhì)上的一種親和層析填 料。明膠是一種高分子糖蛋白,在多種細胞的表面和許多細胞外液(包括血漿)中都發(fā)現(xiàn)了明膠的 存在,它可以特異性的結(jié)合纖維連接蛋白。明膠瓊脂糖凝膠 4FF 是專為純化或除去纖維連接蛋白的 一種親和層析填料。

1 技術(shù)指標(biāo)

2 使用方法

2.1 準備凝膠

(1)讓凝膠和所有的試劑達到工作時的溫度。

(2)配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。

(3)明膠瓊脂糖凝膠 4FF 是保存在 20%的乙醇溶液中,取適量凝膠,清洗掉 20%的乙醇,抽 干。用緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1 的比例)配成勻漿。

2.2 裝柱

(1)將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜),務(wù)必使底端 無氣泡。

(2)用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi),注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口, 使凝膠在柱內(nèi)自由沉降,連結(jié)好柱子頂端柱頭。

(3)打開蠕動泵,讓緩沖液用使用時流速的 1.33 倍的流速流過,使柱床穩(wěn)定。用 2~3 倍柱體 積的緩沖液平衡柱子。

2.3 平衡 讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子,到流出液電導(dǎo)和 pH 不變。

2.4 上樣 (1)樣品用平衡液配制,常用磷酸鹽緩沖液或 Tris-HCl 緩沖液,渾濁的樣品要離心和過濾后 上樣。

(2)一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上,用平衡液洗去雜質(zhì),再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo) 產(chǎn)品。

2.4 洗脫 明膠-瓊脂糖凝膠 4FF 可以采用不同的方式洗脫纖維連接蛋白:

(1)使用含有溴鹽的緩沖液,例如溴化鈉或溴化鉀,并在低于平衡緩沖液 pH 值的條件下洗脫。 一種推薦的洗脫緩沖液是:0.05 M 的醋酸鈉,pH 值 5.0,含 1.0 M 的溴化鈉或溴化鉀。

(2)可以在平衡緩沖液中加入 8 M 的脲,來洗脫吸附在凝膠上的纖維連接蛋白。

(3)纖維連接蛋白還可以通過在平衡緩沖液中添加精氨酸來進行洗脫。

2.6 再生 根據(jù)樣品的性質(zhì),明膠瓊脂糖凝膠 4FF 可以再生,以達到重復(fù)使用的目的。可以采用 2-3 柱體 積的高 pH 值(0.1 M 的 Tris - HCl,0.5 M NaCl,pH 值 8.5)的緩沖液和低 pH 值(0.1 M NaAC,0.5 M NaCl,pH 值 4.5)的緩沖液交替清洗凝膠。一個周期重復(fù) 3 次,然后用 3-5 倍柱體積的平衡緩沖 液平衡,即可進行下次試驗。如果在純化過程中使用了洗滌劑或變性劑(如 8 M 尿素),那么這些 洗滌劑也可以用于洗脫緩沖液中。 2.7 清洗 在一些應(yīng)用中,像變性的蛋白質(zhì)或脂類這樣的樣品,在再生過程沒有被洗脫下來,可以通過加 入一些洗滌劑,例如:0.1%的 Triton X-100 ,在 37°C 的條件下洗一會。立即用至少 5 倍柱體積的 結(jié)合緩沖重新平衡。 2.8 儲存 明膠-瓊脂糖凝膠 4FF 應(yīng)儲存在 4-8℃,20%的乙醇溶液中。 特別注意: 上樣之前,樣品必須去除色素,否則色素會被吸附到填料上,影響填料的正常使用。

    
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