等電聚焦電泳方法

一.儀器設(shè)備：

     電泳儀，電泳槽，注射器，燒杯，量筒，試管，漏斗，濾紙，刻刀，移液器。

二.試劑配制：

    1.電極緩沖液：

       正極緩沖液：1mol/LH3PO4,11.5ml85%磷酸加水至100ml。

       負(fù)極緩沖液：1mol/LNaOH,4g氫氧化鈉加水至100ml。

    2.品提取液：

        40%制糖：40g蔗糖加水至100ml。

    3.順丁烯二酸緩沖液：

        3.08gNaOH+5.8g順丁烯二酸加水至1000ml。

     4.1%a-奈酯：

        1g醋酸-a-奈酯+100ml正丁酯。

    5.7%冰醋酸：

        70ml冰醋酸加水至1000ml。

     6.固藍(lán)RR鹽+順丁烯二酸緩沖液

三.電泳操作技術(shù)

    1.樣品處理：

        1）浸泡：先將所需種子浸泡一段時(shí)間，以備取胚使用。

        2）取胚：用刻刀把種子的胚取出，放入1.5ml離心管管內(nèi)。

        3）研磨：在離心管內(nèi)加入120ul提取液，將胚研成勻漿，放入冰箱保存。

    2.凝膠制備：

        1）配制凝膠前，應(yīng)把玻璃板準(zhǔn)備好，即將兩塊干凈的玻璃板疊放在一起，之間夾上所需凝膠厚度的膠條進(jìn)行四邊密封，一端留有小口來灌膠，然后用文具夾將玻璃板四周固定好。注意夾子作用力點(diǎn)在膠條正中，以防漏膠。

        2）配制凝膠時(shí)，先將所需儲(chǔ)備液自冰箱中取出放置溫室。

        3）將各種儲(chǔ)備液按一定比例混合（見表）然后加入1ml左右的7號(hào)試劑，攪拌均勻，zui后用注射器吸凈混合液，排除氣泡，緩緩注入玻璃板的夾隙內(nèi)。

        4）將注入混合液的玻璃板靜置放好，隔夜使用。  

載體兩性電解質(zhì)

別名：兩性電解質(zhì)載體：Ampholyte　solution　Ampholine 
性狀；近無色至淺黃色透明液體，有粘性，為一中相對(duì)分子質(zhì)量　300-1000的人工合成的多氨基多羧酸系列兩性化合物的復(fù)雜混合物。  

 溶度：為40％的溶液
用途：用于生物大分子蛋白質(zhì)和酶的等電聚焦電泳
儲(chǔ)存：充氮密封4度干燥保存，SCRC　680007-680021