S-180细胞，小鼠肛门肉瘤细胞   培养需注意：

细胞培养实验所需的物品、器材应进行严格的灭菌或购买无菌的一次性物品。玻璃瓶可拧松瓶盖灭菌（指高压蒸汽灭菌，以下同）或用铝箔纸包住瓶口，和瓶盖分别灭菌。其它玻璃和金属器材用铝箔纸包裹进行灭菌。玻璃吸管应塞上棉花球灭菌，然后置于烘箱中烘干。不适于进行高压灭菌的瓶塞等其它物品，可浸泡在70%酒精中进行灭菌，然后在超净工作台上吹干。细胞培养液和其它不适于高压灭菌的溶液，应通过过滤（采用0.22μm的孔径的滤膜）灭菌。无菌培养室每天都要用0.2%的新洁尔灭拖地面一次，并用紫外线照射灭菌30分钟。超净工作台每次使用前用70%酒精擦拭，然后紫外线照射30分钟。

进入无菌操作室要求穿着无菌工作服、工作帽、口罩?？脊ぷ髑坝?0%酒精对手、前臂及乳胶手套进行消毒。细胞培养等操作应在超净工作台或有空气过滤器的空间内进行。操作前点燃酒精灯，细胞培养的所有操作，如打开或关上试管或培养瓶盖等，都要靠近酒精灯并经过短时间的灼烧。烧过的实验器械，冷却后才能使用。已吸过培养液或其它有机液体的吸管不得再用火焰烧灼。不同液体分别用不同的吸管吸取，不能混用?？呛蟮呐嘌烤×勘苊獯怪狈胖?，同时瓶盖应扣放在超净工作台上，以减少落入细菌的机会。细胞培养物在处理和使用前，不要过早暴露于空气中。在进行转移液体操作时，移液器不能触及瓶口以避免细菌污染或交叉污染。放置吸管时管口向下倾斜，以防止液体倒流引起污染。培养细胞的废弃用品，应放入可封装的容器内。

S-180细胞，小鼠肛门肉瘤细胞  的冻存

细胞冻存的原则是要逐步缓慢降温，以避免细胞内部形成冰晶对细胞造成伤害。
1) 贴壁细胞经消化、离心收集，悬浮细胞经离心收集；
2) 大约10⁶个细胞加入1ml冻存液（细胞培养液和10%DMSO），用吸管吹打，使细胞分散成单细胞悬液；
3) 加入到冻存管中。如用1.8ml的冻存管，每管不要加入超过1.5ml的细胞悬液；
4) 在冻存管上标明细胞名称及冻存日期；
5) 用厚布或卫生纸包裹冻存管，置于4℃半小时，然后置于-20℃两小时，再置于-40℃两小时，然后置于液氮上方置夜；第二天将细胞置于液氮中；如果仅想提取细胞内的东西可以直接放在-20度的冰箱中。
6) 记下冻存管存放的位置，作好冻存记录。

 其他细胞：

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