Capan1细胞株

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常规细胞培养方法

初代培养

原理

将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。    

仪器、材料及试剂

仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃）

材料：动物组织块

试剂：1640培养基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank′s液，碘酒

初代消化培养法

1.准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟?？脊ぷ髑跋认词?、75%酒精擦拭手至肘部。

2.布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。

3.处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。

4.剪切：用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞。

5.消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。

6.分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速（500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。

7.计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。

8.培养：置于36.5℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易生霉菌，每次换液时需要换新塞。

我们实验室细胞传代的一般方法

这一方法较简单，不需要离心，而且消化后细胞很少聚集成团，具体步骤如下：

1、吸尽待传代细胞瓶内的培养液，按1：1 的比例加入适量0.25％胰酶和0.0 2％EDTA（一般100ml培养瓶各加2滴管消化（消化时不要晃动培养瓶，以免消化不*而导致细胞成片脱落，从而导致细胞成团，无法吹散）。

2、消化致细胞变圆，细胞相互脱离接触但还未从瓶壁脱落时，吸尽胰酶和EDTA。

3、利用残留的胰酶和EDTA继续消化数分钟。

4、加入适量培养液，反复吹打，然后分别接种致新的培养瓶。

注：消化的时间需根据不同细胞摸索确定。

ACC-2人涎腺腺样囊性癌细胞

ACC-3人腺样囊性癌

ACHN人肾透明细胞癌细胞

AE-1杂交瘤细胞抗AChE

AE-2杂交瘤细胞抗AChE

AGS人胃腺癌细胞

AN3CA人子宫内膜腺癌细胞

ANA-1小鼠巨噬细胞

ARO甲状腺癌细胞（未分化）

AsPC-1人转移胰腺腺癌细胞

ATT-20小鼠垂体瘤

B16小鼠黑色素瘤细胞

B16-F10小鼠皮肤黑色素瘤细胞

B95-8绒猴EBV转化的白细胞

BALB/3T3 clone A31小鼠胚胎成纤维细胞

Bcap-37人乳腺癌

BEL-7402人肝癌

BEL-7404人肝癌

BEL-7405人肝癌

Beta-TC-6小鼠胰岛素瘤胰岛β细胞

BGC-823低分化胃腺癌

BHK-21 [C-13]仓鼠肾成纤维细胞

BIU-87人膀胱癌细胞

BMSC人骨髓间充质干细胞

BNL CL.2小鼠胚胎肝细胞

BRL大鼠肝细胞

BRL 3A大鼠肝细胞

BT-20人乳癌

BT-325人脑多形性胶质瘤细胞

BT474人乳腺导管癌细胞

BT-549人乳腺管癌细胞

BxPC-3人原位胰腺腺癌细胞

C127小鼠乳腺肿瘤细胞

C200人卵巢癌

C26小鼠结肠癌

C2C12小鼠成肌细胞

C-33 A人子宫颈癌

C3H小鼠胚胎成纤维细胞

C6大鼠脑胶质瘤细胞

Ca Ski人宫颈癌肠转移细胞

Caco-2人结直肠腺癌细胞

CaKi-1人肾透明细胞癌细胞

CaKi-2人肾透明细胞癌细胞

CAL-27人舌鳞癌细胞

Calu-1人肺癌细胞

Calu-3人肺腺癌 (胸水)

Calu-6人退行性癌细胞

CaOV3人卵巢癌细胞

Capan1人胰腺癌细胞

Capan2人胰腺癌细胞

CaSki人宫颈肠转移癌细胞

CBRH-7919大鼠肝癌细胞

CCD-1095Sk人乳腺浸润性导管癌旁皮肤细胞

CCRF-CEM人急性淋巴细胞白血病T淋巴细胞

CEM/C1人急性淋巴细胞白血病细胞

CFPAC-1人胰腺癌细胞

Chang liver人张氏肝细胞

CHL仓鼠肺细胞

CHO中国仓鼠卵巢细胞

CHO/dhFr仓鼠卵巢细胞,二氢叶酸还原酶缺陷

CHO-K1仓鼠卵巢细胞亚株

CL1人前列腺癌

CCRF-CEM人鼻咽癌细胞

CNE-2人鼻咽癌细胞

COLO 205人结肠癌细胞

COLO 320DM人结直肠腺癌细胞

COLO-704人卵巢癌细胞

COLO720E人卵巢癌细胞

COS-1非洲绿猴SV40转化的肾细胞

COS-7非洲绿猴SV40转化的肾细胞

COV362人卵巢癌细胞

COV434人卵巢癌细胞

COV504人卵巢癌细胞

COV644人卵巢癌细胞

CRFK猫肾细胞