详细介绍
产品分类:培养基
储存条件 室温,24个月
用途 质粒制备、蛋白质表达
注意事项 主要由胰蛋白胨和酵母提取物、磷酸盐、琼脂组成。如要求无菌,可高压灭菌15~20min。
公司产品仅用于科研具有质量可靠、效果稳定、灵敏度高、操作简单、易保存等特点,咨询并订购!
产品名称 | 规格 | 货号 |
TB固体培养基粉剂 | 1L | FS-R6416 |
配制与标定的实验原理:
1、用EDTA二钠盐配制EDTA标准溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一种白色晶体粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室温溶解度为0.02g/100g H2O。
2、标定EDTA标准溶液的工作基准试剂,基准试剂的预处理:称量前一般应先用稀盐酸洗去氧化层,然后用水洗净,烘干。
配制步骤:
1、取适量锌片放在100mL烧杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自来水、纯水洗净,烘干、冷却。
2、用直接称量法在干燥小烧杯中准确称取0.15~0.2g Zn,盖好小表面皿。
3、用滴管从烧杯口加入5mL 1:1 盐酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地将溶液转移至250mL容量瓶中,用纯水稀释至标线,摇匀。
实验方法与判定:
1.对照品溶液的稳定性
2.对照品溶液的配制:精密量取脑对照品适量,加无水乙醇制成每1ml含脑1mg的溶液,作为对照品溶液。
3.色谱条件:以交联键合聚乙二醇为固定相的毛细管柱;柱温120℃;进样口温度250℃;检测器温度250℃;分流进样,分流比10:1。理论塔板数按脑计算应不低于10000。
4.实验方法:配制的对照品溶液,一份置冷处保存,一份置室温中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份对照品溶液,三种储备液同时稀释制成每1ml中约含50ug的溶液。照气相色谱法,并依据新对照品的峰面积计算原对照品溶液的含量。记录下来,保证原对照品溶液含量在考察期相对平均偏差不超过2.0%,验证对照品溶液在使用期内稳定可靠。
使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意:用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型,培养基,生长条件和细胞代谢率而变化,推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve),即剂量反应性曲线,来确定最佳筛选浓度。
一般而言,哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意:为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株,需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度,可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现,至少选择5个浓度。
1) 第一天:未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上,37℃,CO2培养过夜;注:对于需要更高密度来检测活力的细胞,可增加接种量。
2) 根据细胞类型,设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例,可设定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml,然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天:替换旧的培养基,换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后,用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意:细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密,其效率会降低。为了得到较好的筛选效果,最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克?。洌┑男纬汕榭?。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间,这取决于宿主细胞类型,转染,以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板,继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。
P450家族成员2E1(CYP2E1)CYP2E1 ELISA Kit角蛋白3+12抗体包装5g
P450家族成员2B6(CYP2B6)CYP2B6 ELISA Kit接头蛋白CrkL抗体包装100g
P450家族成员27B1(CYP27B1)CYP27B1 ELISA Kit色P450 24A1抗体包装25g
C氧化亚基Ⅲ(COX3)COX3 ELISA Kit色P450 2R1抗体包装25g
C(CYCS)CYCS ELISA Kit铜代谢结构域蛋白10抗体包装1g
细胞间粘附分子5(ICAM5)ICAM5 ELISA Kit钙周期结合蛋白抗体包装5g
细胞间粘附分子2(ICAM2)ICAM2 ELISA Kit7号染色体开放阅读框69抗体包装100g
细胞间粘附分子1(ICAM1)ICAM1 ELISA Kit铜代谢结构域蛋白3抗体包装25g
细胞骨架活性调节蛋白(ARC)ARC ELISA Kit19号染色体开放阅读框71抗体包装5g
细胞分裂周期因子25(CDC25)CDC25 ELISA Kit异染色体同源蛋白1抗体包装25g
细胞程序性死亡蛋白1配体1(PDCD1LG1)PDCD1LG1 ELISA Kit铜代谢结构域蛋白8抗体包装5g
硒蛋白P1(SEPP1)SEPP1 ELISA Kit霉抗体包装1g
无翅型MMTV整合位点家族成员5A(WNT5A)WNT5A ELISA Kit4号染色体开放阅读款包装250mg
无翅型MMTV整合位点家族成员3A(WNT3A)WNT3A ELISA Kit凋亡加强结构域蛋白11抗体包装5g
无翅型MMTV整合位点家族成员10B(WNT10B)WNT10B ELISA Kit色B抗体包装25g
小单孢菌属菌种Micromonospora│sp. 质量规格:>99%,USP组织蛋白K试剂盒戊型肝炎病IgG抗体国家参考品
大肠埃希氏菌Escherichia│coli 质量规格:HPLC>98%,标准品组织蛋白H试剂盒巨?。–MV)IgM抗体国家参考品
平滑假丝酵母Candida│parapsilosis 质量规格:>99%,超纯组织蛋白G自身抗体试剂盒型肝炎病抗体快速检测试剂国家参考品
TB固体培养基粉剂GATA-4/FITC 荧光标记抗GATA结合蛋白4IgG小豆蔻油 FCC
GATA-5/FITC 荧光标记抗GATA结合蛋白5IgGL-香芹 97%
GATA-6/FITC 荧光标记抗GATA结合蛋白6IgGL-香芹 95%,FG
Gax/FITC 荧光标记生长终止特异性同源盒因IgG杉叶油 natural
GCK/FITC 荧光标记抗葡萄糖激IgG(+)-二氢香芹酮 98%
GCN2/FITC 荧光标记兔抗人、大、小鼠蛋白激GCN2蛋白IgG顺式二氢香芹酮 97%
Phospho-GCN2 (Thr898) /FITC 荧光标记兔抗人、大、小鼠化蛋白激GCN2蛋白IgG二氢香芹脂 98%
phospho-GCN2 (Thr667) /FITC 荧光标记兔抗人、大、小鼠化蛋白激GCN2蛋白IgG3,4-二-1,2-环戊二酮 97%