详细介绍
抗体制备过程:
1.材料与试剂
a.提取的动物 Ig
b.弗氏*佐剂和弗氏不*佐剂
c.青霉素和链霉素
d.实验动物 兔
e.其它材料及试剂
2、选择实验活体。
3、进行动物免疫实验。
4、试取血样进行测试,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,杀死实验活体,采集全部血清。
6、纯化出抗体。
7、鉴定抗体。胎牛血清(无菌采制)
公司专业供应的抗体,抗体是用于化学反应、分析化验、研究实验、教学实验、化学配方使用的纯净化学品,产品品质,价格实惠,多种规格供应,售后完善。
产品名称 | 白介素1-β转化酶样凋亡蛋白酶6抗体 |
英文名称 | Caspase-9 |
规格 | 0.1ml |
抗体的制备过程:
1. 免疫原的制备
普通的大分子蛋白,通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物
常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量时需要用到狗、绵羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用心脏采血,家兔、山羊、绵羊可采用静脉采血。
4. 免疫血清的纯化与鉴定
得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
5. 免疫血清的保存
建议将抗体分装后进行保存??固逡话惚冉衔榷?,在-80℃ ~-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
抗体的制备过程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物:常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量时需要用到狗、绵羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用心脏采血,家兔、山羊、绵羊可采用静脉采血。
4. 免疫血清的纯化与鉴定:得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
5. 免疫血清的保存:抗体一般比较稳定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
抗体分子标记技术:
(一)原理
当应用化学氧化法时(NaI)遇强氧化剂,离子被氧化为分子,所生成的自由分子可与某些基团进行卤化反应。蛋白质分子可进行卤化反应的基团主要为酪氨酸残基,某些组氨酸残基也可能进行化。在应用胺T( Chloramine T)法的实验中,所用的氧化剂(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)强挥发性的有机溶剂中。该溶剂加入试管后,先让其挥发(即让氧化剂将试管包被),然后把Na125I和蛋白质液加入包被好的试管中,反应完成即将混合液移入他管终止反应。
(二)准备
1.试剂
经亲和层析纯化的多克隆抗体或单克隆抗体;0.5mol/L磷酸钠缓冲液,pH7.5;无载体的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鲜制备的含2mg/m1络胺T的0.5mol/L磷酸钠缓冲液(pH7.5);胺T反应终止缓冲液;
2.仪器
凝胶过滤柱;¥-记数器;玻璃纤维滤。
(三)操作要点
1.用胺T法进行化,也可在大约pH7.0的缓冲液中进行;
2.如果氧化反应损伤蛋白质,可将抗体与异硫氰酸荧光素(FITC)偶联)胺T量减少到0.02mg/m,并将偏重亚硫酸液的浓度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的试管可在干燥器中,于室温下保存多年;
4.1251标记的抗体,在制备后六周内均可使用(1251的半衰期为59.6天);
5.要注意保证所用的Na1251是新鲜的,陈旧制剂的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶尔会对抗原的抗体结合位点有干扰,因此降低其结合能力,但这种情况很少见。
兔主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHCⅡ/RLAⅡ)皱木耳拉丁属名: Auricularia delicata (Fr.) Henn.
兔子凝血酶受体(TR)酿酒酵母拉丁属名: Saccharomyces cerevisiae
兔子可溶性P选择素(sP-selectin)印度芽孢杆菌拉丁属名: Bacillus indicus
兔子Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)粉状米勒酵母拉丁属名: Millerozyma farinosa
兔子Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)希瓦氏菌拉丁属名: Shewanella sp.
兔子Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)猪霍乱沙门氏菌拉丁属名: choleraesuis
兔子Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)碎囊毛霉拉丁属名: Mucor petrinsularis
兔子Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNT)美澳型核果褐腐病菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用
兔子凝血因子Ⅱ(FⅡ)阪崎肠杆菌拉丁属名: Enterobacter sakazakii
兔子C反应蛋白(CRP)刺孢小克银汉霉轮生变种拉丁属名: Cunninghamella echinulata var. verticillata
兔子内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)固氮菌用途: 固氮。
兔子胆固酯转移蛋白(CETP)黄赭色链霉菌注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用
兔子可溶性粘附分子(Sam)双孢蘑菇拉丁属名: Agaricus bisporus
兔子抗中性粒细胞颗??固?/font>(ANGA)鹿角芝注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用
兔子孕激素/孕酮(PROG)黄青霉注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用
兔子胶原酶II(Collagenase II)污黑腐皮壳注意事项: 仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的,不可用于类或动物的临床诊断或治疗,非药用,非食用
白介素1-β转化酶样凋亡蛋白酶6抗体内皮细胞的分化蛋白6抗体Bezafibrate中文名:苯扎贝特别名:分子式:C19H20Cl4
内质网蛋白29抗体Benzoyleneurea中文名:亚苯甲?;灞鹈悍肿邮剑篊8H6N2O2
核酸内切酶G抗体N-Benzylanthranilic acid中文名:N-苄基别名:分子式:C14H132
真核翻译起始因子2C1抗体N-Benzylmaleimide中文名:N-苄基马来酰亚胺别名:分子式:C11H92
E1A样分化抑制因子3抗体3-Benzoylpyridine中文名:3-苯甲酰吡啶别名:分子式:C12H9