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抚生试剂-PEG分子治疗浓度对融合率有明显影响
阅读:512 发布时间:2014-4-14PEG分子治疗浓度对融合率有明显影响
PEG的分子质量和浓度对融合率有明显影响,相对分子质量在400~6000,浓度在10%~60%均可促融。但相对分子质量和浓度越大,促融率越高的同时,黏度和对细胞的毒性也越大。常用浓度为40%~50%,低于30%融合率较低,高于50%则毒性较大。实验经验表明,Merck公司的相对分子质量为4000的PEG促融合效果。配制方法:取PEG 2g沸水中煮30min或高压15min,冷却至50~60℃时加入37℃预温的不*培养液2ml,混匀后4℃保存。
2)融合的关键除了无菌操作之外就是动作一定要轻柔,就像制备感受态细胞一样,而且一定要混匀,不然在镜下会出现成团的细胞,会影响本就不高的融合率。
3)污染的处理。由于杂交瘤细胞的培养周期长,工作量大,污染是zui需要引起高度重视的。当遇到可疑污染的培养孔,先将孔中液体抽吸丢弃,加入lmol/L NaOH数滴冲洗两次,再加入0.2ml NaOH并换上新消毒的培养皿盖继续培养。如板上出现多处污染,应整板废弃。