国产日产欧美精品-亚洲国产综合久久精品-色综合色国产热无码一-亚洲欧美日本国产,免费观看一区二区三区_在线观看片A免费不卡观看_亚洲а∨天堂久久精品_99久无码中文字幕一本久道

產(chǎn)品展廳收藏該商鋪

您好 登錄 注冊(cè)

當(dāng)前位置:
上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>技術(shù)文章>PCR引物是如何合成?

技術(shù)文章

PCR引物是如何合成?

閱讀:278          發(fā)布時(shí)間:2024-6-3

        PCR引物合成是指通過(guò)測(cè)定引物的OD值,溶解引物,最終合成引物的一個(gè)完善的過(guò)程。目前引物合成基本采用固相亞磷酰胺三酯法。亞磷酰胺三酯法合成DNA片段,具有高效、快速的偶聯(lián)以及起始反應(yīng)物比較穩(wěn)定的特點(diǎn)。亞磷酰胺三酯法是將DNA固定在固相載體上完成DNA鏈的合成的,合成的方向是由待合成引物的3′端向5′端合成的,相鄰的核苷酸通過(guò)3′→5′磷酸二酯鍵連接。

QQ截圖20240603140828.jpg

合成四步驟:
  第一步,
是將預(yù)先連接在固相載體上的活性基團(tuán)被保護(hù)的核苷酸與三氯yi酸反應(yīng),脫去其5′-羥基的保護(hù)基團(tuán)DMT,獲得游離的5′-羥基。
  第二步,
合成DNA的原料,亞磷酰胺保護(hù)核苷酸單體,與活化劑四氮唑混合,得到核苷ya 磷酸活化中間體,它的3′端被活化,5′-羥基仍然被DMT保護(hù),與溶液中游離的5′-羥基發(fā)生縮合反應(yīng)。
  第三步,
帶帽(capping)反應(yīng),縮合反應(yīng)中可能有極少數(shù)5′-羥基沒有參加反應(yīng)(少于2%),用yi酸酐和1-甲基咪唑終止其后繼續(xù)發(fā)生反應(yīng),這種短片段可以在后續(xù)環(huán)節(jié)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要來(lái)選擇純化方式分離掉。
  第四步,
在氧化劑碘的作用下,亞磷酰形式轉(zhuǎn)變?yōu)楦€(wěn)定的磷酸三酯。
 
    經(jīng)過(guò)以上四個(gè)步驟,一個(gè)脫氧核苷酸被連接到固相載體的核苷酸上。再以三氯yi酸脫去它的5′-羥基上的保護(hù)基團(tuán)DMT,重復(fù)以上步驟,直到所有要求合成的堿基被接上去。合成過(guò)程中可以觀察TCA處理階段的顏色判定合成效率。通過(guò)an水高溫處理,連接在CPG上的引物被切下來(lái),通過(guò)OPC, PAGE等手段純化引物,成品引物用C18濃縮,脫鹽,沉淀。沉淀后的引物用水懸浮,測(cè)定OD260定量,根據(jù)定單要求分裝。

收藏該商鋪

請(qǐng) 登錄 后再收藏

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~

對(duì)比框

產(chǎn)品對(duì)比 產(chǎn)品對(duì)比 聯(lián)系電話 二維碼 在線交流

掃一掃訪問(wèn)手機(jī)商鋪
021-52961052
在線留言
株洲县| 葫芦岛市| 南岸区| 马鞍山市| 弋阳县| 乌什县| 新安县| 灌南县| 广丰县| 仁布县| 朝阳市| 佛冈县| 铜陵市| 孟州市| 武安市| 盐城市| 江城| 东安县| 承德县| 峨山| 西林县| 南靖县| 聂荣县| 麻江县| 东海县| 西安市| 禄丰县| 安陆市| 普兰店市| 寿宁县| 台中县| 广丰县| 樟树市| 北海市| 仙游县| 博湖县| 昌黎县| 泸西县| 和顺县| 开化县| 比如县|