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技術(shù)文章

ELISA試劑盒操作常見問題及流程

閱讀:271          發(fā)布時間:2019-7-4

                               ELISA試劑盒操作常見問題及流程

 

上海撫生ELISA 試劑 為你揭幕大家會出現(xiàn)的問題及流程。

               1.一次ELISA實驗需要多長時間?

雙抗體夾心ELISA法一次實驗需要3.5-4小時,競爭ELISA法一次實驗需要2-2.5小時。

2.血清樣本如何處理?

全血標本于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

3. 血漿樣本如何處理?

建議選擇EDTA或者檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,于1000×g離心15分鐘,仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

4.細胞上清液樣本如何處理?

檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(1000×g)。仔細收集上清。5.細胞裂解液樣本如何處理?

檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或者超聲破碎,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心10分鐘左右(5000×g)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

6.組織樣本如何處理?

用預(yù)冷的PSB (0.01M,pH=7.4)沖洗組織,以去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣本對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復(fù)凍融。*后將勻漿液于5000×g 離心5~10分鐘,取上清檢測。

 

 

 

 

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