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紫外可見分光光度計(jì)法測(cè)羥胺殘留量

閱讀:5545      發(fā)布時(shí)間:2016-5-24
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羥胺殘留量測(cè)定法

本法系依據(jù)在堿性條件下,羥胺與碘反應(yīng)生成亞硝

. 然后與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng),再與CT萘胺偶

聯(lián)形成有色的偶氮化合物,采用紫外-可見分光光度法測(cè)

定羥胺的含童。

試劑1) 6%乙酸鈉溶液稱取無水乙酸鈉6g

適顯水溶解并稀釋至100ml混勻,即得。

(2) 1% 對(duì)氨基苯磺酸溶液稱取對(duì)氨基苯磺酸

0. 50g,加適M 2 5 %乙酸溶液溶解后稀釋至50ml,即得。

(3) 1 . 3 %碘溶液稱取碘0.65g ; 溶于冰醋酸,稀

釋至5 0 m l ,即得。于通風(fēng)櫥中配制和使用。

(4) 0. 4mol/L硫代硫酸鈉溶液稱取硫代硫酸鈉

3. 16g,溶于適量水中,稀釋至5 0 m l ,即得。

(5) 0. 6 % a-萘胺溶液稱取a-萘胺0. 3 g . 溶于30%

乙酸,稀釋至50ml,即得。于通風(fēng)櫥中配制和迚jfl。

鹽酸羥胺對(duì)照品溶液的制備用水將鹽酸羥胺對(duì)照品

M 稀釋至每l m llOOOnmol,作為貯備液。精密量取

貯備液適量,用水定量稀釋至每l m l150nmol、

120nmol90nmol、60nmol 30nmol,作為不同濃度的對(duì)照品溶液,用前配制。

測(cè)定法精密量取供試品0.3ml置試管內(nèi),依次加

6 % 乙酸鈉溶液1.3ml、1 % 對(duì)氨基苯磺酸溶液0.2ml

1 . 3 %碘液0.1ml,混勻,放置1 0分鐘,加0. 4mol/L

代硫酸鈉溶液50M1,混勻脫色,加0. 6 % a-萘胺溶液40^1

混勻,室溫放置6 0分鐘,經(jīng)每分鐘10 000轉(zhuǎn)離心5 分鐘

后,取上清液,照紫外-可見分光光度法C通則0401) ,

波長(zhǎng)52 0 n m處測(cè)定吸光度。精密量取不同濃度的對(duì)照品

溶液各0.3tnl,置試管中,自依次加6% 乙酸鈉溶液

中國(guó)藥典2015年版

1.3ml起,同法操作。精密量取水0.3ml置試管中,自

6 % 乙酸鈉溶液1.3ml起,同法操作,作為空白對(duì)

照。以對(duì)照品溶液的羥胺濃度對(duì)相應(yīng)吸光度作直線回歸,

求得直線回歸方程;將測(cè)得的供試品的吸光度代人直線回

歸方程,即得供試品的殘留羥胺濃度(nmol/ml) ,再根據(jù)

供試品的蛋白質(zhì)含量按下式計(jì)算出羥胺殘留量(nmol/mg

蛋白質(zhì))。

供試品羥胺殘留量供試品的殘留羥胺濃度(nmol/ml)

(nmol/mg蛋白質(zhì)) 供試品的蛋白質(zhì)含量(mg/ml)

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