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DNA限制酶分析與切割

2013-2-21  閱讀(1220)

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儀器用具:
37℃及65℃水浴或恒溫槽

藥品試劑:
質(zhì)體pBluescript II SK (-)
限制酶:BamHI, PvuII 及ScaI (濃度均為10 units/μL, Invitrogen)
10×Reaction buffer 6 (0.5 M Tris-HCl, pH 7.4; 60 mM MgCl2; 0.5 M NaCl; 0.5 M KCl)
無菌水

方法步驟:
1) 取7 支微量離心管,依下表所列體積 (單位 μL) 依序加于管壁不同位置上。

◆ 每次吸取限制酶時,請換一支新的微量移液器頭以免造成污染。
總體積為20 μL,短暫離心后,以微量移液器頭輕輕混合,#1 置冰浴中,其余各管置于37℃反應(yīng)1 h。
2) 置65℃水浴15 min 中止反應(yīng)后,移置冰浴冷卻,即可進行電泳分析。

 

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