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連接scFv和載體DNA并轉(zhuǎn)化大腸桿菌,構(gòu)建scFv突變文庫

2013-1-14  閱讀(1394)

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[方法]
1.配制1個50ul連接混合液,包含:
● 10×連接緩沖液,5uI
● 水,16ul
● NcoI和NotI消化的pHENl(100g/ul), 20ul
● VcoI和NotI消化的scFv文庫(100g/ul), 7ul
● T4 DNA連接酶(400U/ul),2ul
2.16℃孵育反應液過夜。
3.乙醇沉淀DNA并用70%乙醇洗滌沉淀1次。
4.重懸DNA于10ul水中。
5.用4份相同的2.5ul的DNA分別電轉(zhuǎn)化到電感受態(tài)大腸桿菌TGl細胞中。
6.確定文庫容量,并將菌文庫材抖儲存于-70℃。

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