国产日产欧美精品-亚洲国产综合久久精品-色综合色国产热无码一-亚洲欧美日本国产,免费观看一区二区三区_在线观看片A免费不卡观看_亚洲а∨天堂久久精品_99久无码中文字幕一本久道

上海寶葉生物科技有限公司

中級會員·6年

聯(lián)系電話

13391038817

您現(xiàn)在的位置: 首頁> 公司動態(tài)> AP融合蛋白的亞克隆和表達
中級會員·6年
聯(lián)人:
蔣先生
話:
機:
13391038817
址:
上海市嘉定區(qū)新源路155弄
化:
www.shjsbio.com
網(wǎng)址:
www.shjsbio.com

掃一掃訪問手機商鋪

AP融合蛋白的亞克隆和表達

2012-12-18  閱讀(1671)

分享:

1.使用來自篩選出的噬菌??寺〉哪0鍰NA,以及包含與AP融合表達載體的克隆位點相對應的限制性酶切位點的寡核苷酸引物,進行PCR反應。
2.通過瓊脂糖凝膠電泳檢測正確大小的擴增產物。選擇相應方法對PCR產物進行純化。
3.用對應于克隆位點的限制性內切酶消化PCR產物,使用標準的方法將此產物連接到相同酶切后的AP融合蛋白表達載體中。
4,通過標準的方法將連接產物轉化入大腸桿菌中,鋪到含100ug/ml氨芐青霉素的LB平板上。挑取單克隆,利用標準的方法(如限制性酶切或PCR)鑒定是否有插入序列。
5,在LB+100ug/m1氨芐青霉素培養(yǎng)基中,過夜培養(yǎng)少量(約5m1)的陽性克隆菌液。以l/100接種于適合所用誘導系統(tǒng)的表達培養(yǎng)基中。
6.用適合所用的誘導系統(tǒng)的方法培養(yǎng)細胞并誘導表達。7500g離心收集細胞,并棄去上清液。將細胞沉淀在一20℃冷凍超過4小時,或在酒精/干冰混合物上冷凍10分鐘。
7.輕輕地將細胞重懸于TE+PMSF緩沖液中以釋放胞質蛋白。 離心(7500g)沉淀細胞并收集上清液。
8.用一個因所用標簽而異的方法進一步純化融合蛋白。這將使融合蛋白的定量變得更容 易,并能除去可能影響酶解檢測的雜質蛋白。但是,如果AP融合蛋白的表達水平較 高,也可以直接使用胞質裂解原液,因為檢測中已含有一個有效的親和性純化步驟。9.用SDS—PAGE分析胞質蛋白和一系列濃度的基準純化AP。用凝膠光密度測量法(gel densitometry)將樣品中的AP融合蛋白水平定量。

www.shjsbio.com

會員登錄

×

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
產品對比 二維碼 在線交流

掃一掃訪問手機商鋪

對比框

在線留言
雷波县| 西青区| 电白县| 中西区| 佳木斯市| 焉耆| 灵宝市| 天水市| 虎林市| 礼泉县| 昌都县| 曲水县| 怀化市| 昆山市| 石柱| 岳普湖县| 介休市| 福鼎市| 陈巴尔虎旗| 琼海市| 尼木县| 全南县| 长春市| 鲁山县| 祁门县| 遂昌县| 长汀县| 西宁市| 娄底市| 宾阳县| 辛集市| 青州市| 息烽县| 儋州市| 舒城县| 宜川县| 玉溪市| 宜良县| 罗定市| 前郭尔| 夏河县|