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液相色譜儀檢定中常遇到的問題

閱讀:2164        發(fā)布時(shí)間:2015-12-30
   由于HPLC系統(tǒng)中氣泡的存在,會(huì)造成色譜圖上出現(xiàn)尖銳的噪聲峰,嚴(yán)重時(shí)會(huì)造成分析靈敏度下降;氣泡變大進(jìn)入流路或色譜柱時(shí)會(huì)使流動(dòng)相的流速變慢或不穩(wěn)定,使基線起伏。造成上述現(xiàn)象的主要原因有三條:一是流動(dòng)相溶液中往往因溶解有氧氣或混入了空氣而形成氣泡;二是系統(tǒng)開始工作時(shí)未能將流路中的空氣驅(qū)趕干凈;三是在注入樣品時(shí)不注意混入了空氣。
  為了避免這類問題的出現(xiàn),HPLC實(shí)際分析過程中必須重視對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行脫氣處理;在HPLC系統(tǒng)開始工作前,可以用注射器連接恒流泵的排空閥,抽入流動(dòng)相,將流路中的空氣驅(qū)趕干凈;在注入樣品前注意排出樣品注射器中的空氣。
  2.柱溫
  在操作HPLC時(shí),色譜柱是在室溫環(huán)境下工作的。大多數(shù)的工作環(huán)境溫度是不斷變化的,溫度的差別就會(huì)引起較復(fù)雜的問題。溫度的影響在所有的色譜分析方式中都是存在的,HPLC方法中的洗脫方式受溫度的影響。
  等度洗脫時(shí)溫度會(huì)影響保留時(shí)間,當(dāng)溫度升高時(shí)所有的色譜峰都前移了,等度洗脫時(shí)一般溫度每升高1℃,保留時(shí)間會(huì)縮短(1~3)%。溫度變化對(duì)梯度洗脫和等度洗脫的影響趨勢是一樣的。溫度變化對(duì)梯度洗脫的影響要小于對(duì)等度洗脫的影響。即便如此,若梯度洗脫時(shí)不控制溫度的話,保留值一般也會(huì)有較大的變化。溫度變化還可能引起選擇性顯著變化。
  正如柱子不能*平衡將導(dǎo)致保留時(shí)間的重現(xiàn)性差一樣,柱溫不平衡也會(huì)導(dǎo)致不理想的后果,這個(gè)問題在峰寬上的影響尤其明顯。當(dāng)溫度變化時(shí)除了選擇性和保留時(shí)間的變化之外,峰寬也會(huì)發(fā)生變化。升高溫度通常會(huì)使理論塔板數(shù)升高,峰寬變窄,由于峰面積不變,峰越窄就會(huì)越高,因此升高溫度可以達(dá)到更小的檢測限。
  柱子里的溫度變化也會(huì)影響峰形。當(dāng)流動(dòng)相和柱子之間的溫差增大時(shí),由溫度不平衡而導(dǎo)致的峰變形就會(huì)加劇。
  為了獲得一致的結(jié)果我們必須要控制柱溫,使用柱溫箱是的辦法。如果沒有柱溫箱,zui有效的辦法就是將色譜柱隔絕在一個(gè)溫度波動(dòng)zui小的地方。

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