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高效液相色譜儀常用的三種測(cè)定方法介紹
閱讀：1807 發(fā)布時(shí)間：2022-12-6
高效液相色譜儀(HPLC)是應(yīng)用高效液相色譜原理，主要用于分析高沸點(diǎn)不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定的和分子量大的有機(jī)化合物的儀器設(shè)備。它由儲(chǔ)液器、泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器、記錄儀等幾部分組成。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相，被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過(guò)程，各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出，通過(guò)檢測(cè)器時(shí)，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)。
高效液相色譜儀分析中常用的定性方法有利用已知標(biāo)準(zhǔn)樣品定性、利用檢測(cè)器的選擇性定性和利用紫外檢測(cè)器全波長(zhǎng)掃描功能定性等。
一、利用已知標(biāo)準(zhǔn)樣品定性：
利用標(biāo)準(zhǔn)樣品對(duì)未知化合物定性是常用的高效液相色譜定性方法。
由于每一種化合物在特定的色譜條件下（流動(dòng)相組成、色譜柱和柱溫等相同），其保留值具有特征性，因此，可以利用保留值進(jìn)行定性。如果在相同的色譜條件下，被測(cè)化合物與標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留值一致，可以初步認(rèn)為被測(cè)化合物與標(biāo)準(zhǔn)樣品相同。若流動(dòng)相組成經(jīng)多次改變后，被測(cè)化合物的保留值仍與標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留值一致，就能進(jìn)一步證實(shí)被測(cè)化合物與標(biāo)準(zhǔn)樣品為同一化合物。
二、利用檢測(cè)器的選擇性定性：
同一種檢測(cè)器對(duì)不同種類的化合物的響應(yīng)值是不同的，而不同的檢測(cè)器對(duì)同一種化合物的響應(yīng)也是不同的。所以當(dāng)某一被測(cè)化合物同被兩種或兩種以上檢測(cè)器檢測(cè)時(shí)，兩檢測(cè)器或幾個(gè)檢測(cè)器對(duì)被測(cè)化合物檢測(cè)靈敏度比值與被測(cè)化合物的性質(zhì)是密切相關(guān)的，可以用來(lái)對(duì)被測(cè)化合物進(jìn)行定性。這是雙檢測(cè)器定性的基本原理。
雙檢測(cè)器體系的聯(lián)接有串聯(lián)聯(lián)接和并聯(lián)聯(lián)接方式。當(dāng)兩種檢測(cè)器中的一種是非破壞型的，可以采用簡(jiǎn)單的串聯(lián)聯(lián)接方式，方法是將非破壞型檢測(cè)器串接在破壞型檢測(cè)器之前。若兩種檢測(cè)器都是破壞型的，需采用并聯(lián)方式聯(lián)接，方法是在色譜柱的出口端連接一個(gè)三通，分別聯(lián)接到兩個(gè)檢測(cè)器上。在高效液相色譜中常用于定性分析的雙檢測(cè)體系是紫外檢測(cè)器（UVD）和熒光檢測(cè)器（FLD）。
三、利用紫外檢測(cè)器全波長(zhǎng)掃描功能定性：
紫外檢測(cè)器是高效液相色譜中使用廣泛的一種檢測(cè)器。全波長(zhǎng)掃描紫外檢測(cè)器可以根據(jù)被檢測(cè)化合物的紫外光譜圖提供一些有價(jià)值的定性信息。傳統(tǒng)的方法是在色譜圖上某組分的色譜峰出現(xiàn)極大值，即濃度最大時(shí)，通過(guò)停泵等手段，使組分在檢測(cè)池中滯留，然后對(duì)檢測(cè)池中的組分進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，得到該組分的紫外可見(jiàn)光譜圖，再取可能的標(biāo)準(zhǔn)樣品按同樣方法處理。對(duì)比兩者光譜圖即能鑒別出該組分與標(biāo)準(zhǔn)樣品是否相同。某些有特殊紫外光譜圖的化合物也可以通過(guò)對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)譜圖來(lái)識(shí)別。