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上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司

swant 7697說(shuō)明書(shū)

時(shí)間:2019-11-15閱讀:1988
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swant 7697說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品名稱(chēng)鈣網(wǎng)膜蛋白兔多抗 CR 7697

      英文名稱(chēng)  Rabbit anti-calretinin

貨號(hào)  7697

批號(hào) 1893-0114

外觀 凍干粉

      溶解每管用200 µl雙蒸水溶解

規(guī)格200UL

產(chǎn)品描述

兔抗calretinin抗血清是用N末端含有6-his標(biāo)記的重組人calretinin蛋白免疫家兔制備的。

該抗體為兔抗calretinin多克隆抗體[1],與鈣結(jié)合蛋白D-28k和鈣調(diào)素[2]都屬于EF-手性家族的鈣結(jié)合蛋白。7697鈣網(wǎng)膜蛋白特異表達(dá)于包括人、猴子、大鼠、小鼠、豚鼠,雞和魚(yú)的組織中(圖1)與鈣結(jié)合蛋白D-28k或其他已知的鈣結(jié)合蛋白不產(chǎn)生交叉反應(yīng),此特異性取決于改抗原在腦組織中的分布位置。

 

抗體特異性及效價(jià):

1、生物素-親和素標(biāo)記免疫組化檢測(cè)4%多聚甲醛(或10%福爾馬林緩沖液)固定的腦組織冷凍/石蠟切片;

2、免疫酶標(biāo)記/免疫印跡驗(yàn)證;

 

反應(yīng)種屬:

 WB:小鼠、大鼠、豚鼠、兔子、斑馬魚(yú)、食蟹猴、和雞。

 IHC:人,大鼠,小鼠

 

 經(jīng)測(cè)試 應(yīng)用:

 WB,IHC-P/Fc,,ELISA

 WB 免疫印跡; IHC :免疫組織化學(xué); ELISA:酶聯(lián)免疫。

 

稀釋比例

免疫組化(IHC): 12'000 - 15'0004%多聚甲醛/福爾馬林固定組織的冰凍或石蠟切片。

免疫印跡(WB): 11'000 - 12'000

本說(shuō)明書(shū)IHCWB采用的是生物素標(biāo)記法,建議根據(jù)實(shí)驗(yàn)方法及內(nèi)容選擇合適的抗體稀釋比例。

 

儲(chǔ)存:

      解凍后分裝(如每管1ul5ul等)保存于- 80°C冰箱。短期保存-20°C。近期頻繁使用保存于 4°C(增加

      0.01% 疊氮鈉)。 避免反復(fù)凍融。建議分裝小份儲(chǔ)存。

 

應(yīng)用

Calretinin可能屬于“觸發(fā)”鈣結(jié)合蛋白的一類(lèi)。它主要出現(xiàn)在神經(jīng)細(xì)胞亞群中,是間皮瘤的良好標(biāo)志物[3,4]。

 

免疫印跡(WB

1:不同種屬全腦組織蛋白抽提液用于SDS-PAGE Western blot檢測(cè),結(jié)果表明所有種屬均可特異性檢測(cè)到分子量為29-30k Da的條帶。

 

1 2 3 4 5 6 7 8

. 1 7697鈣網(wǎng)膜蛋白對(duì)不同種屬腦組織勻漿液的WB檢測(cè)結(jié)果。上樣順序依次為:1 小鼠;2 大鼠;3 豚鼠;4 兔子;5 食蟹猴;6 斑馬魚(yú);7雞,8重組calretinin蛋白。WB結(jié)果表明,在所有物種中都能檢測(cè)到29kDa的條帶。

 

Calretinin基因敲除小鼠的免疫組織化學(xué)染色

Calretinin高表達(dá)于正常小鼠腦組織神經(jīng)元(圖2a),calretinin基因敲除小鼠腦組織區(qū)域未見(jiàn)陽(yáng)性表達(dá)(圖2b)

 

 

 2a正常小鼠腦組織7697鈣網(wǎng)膜蛋白免疫組化結(jié)果:陽(yáng)性染色分散于大腦皮層神經(jīng)元細(xì)胞。100 X鏡下

2b calretini基因敲除小鼠大腦7697鈣網(wǎng)膜免疫組化染色結(jié)果:未見(jiàn)大腦皮層神經(jīng)元陽(yáng)性染色。100 X鏡下

 

參考文獻(xiàn)

  1. Schwaller B., Buchwald P., Blümcke I., Celio M.R. and Hunziker W. (1994) Characterization of a polyclonal antiserum against the purified human recombinant calcium-binding protein calretinin. Cell Calcium 14: 639-648.
  2. Schiffmann S.N. et al (1999) Impaired motor coordination and Purkinje cell  excitability in mice lacking calretinin. PNAS, 96: 5257-5262.
  3. Gotzos V., Vogt P. and M.R. Celio (1995) Calretinin is a selective marker for malignant pleural mesotheliomas of the epithelial type. Pathol. Res. Pract. 192:137- 147.
  4. Doglioni, C. et al. (1996) Calretinin: a novel immunocytochemical marker for mesothelioma. Am. J. Surg. Pathol. 20:1037-1046.

 

 

 

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