swant 6B3說明書

產(chǎn)品：小鼠抗鈣視網(wǎng)膜蛋白抗體（單克?。?/span>

代碼：6B3

批號：010399

形式：凍干濃縮上清液（不含防腐劑）。

數(shù)量：500µl。

復(fù)溶：用500µl雙蒸餾水。

描述：

用重組人calretinin-22k免疫小鼠產(chǎn)生抗calretinin的抗體6B3[1，2]。鈣視網(wǎng)膜蛋白22k是鈣視網(wǎng)膜蛋白基因的選擇性剪接產(chǎn)物(3)，與鈣視網(wǎng)膜蛋白相同，可達Arg178。融合后以人重組鈣視網(wǎng)膜蛋白為靶標篩選雜交瘤細胞，篩選克隆6B3。抗體6B3識別鈣視網(wǎng)膜蛋白和鈣視網(wǎng)膜蛋白-22k共有的前4個EF手結(jié)構(gòu)域內(nèi)的表位(2)。評價其特異性和效價：a）通過生物素-抗生物素蛋白標記4%多聚甲醛（或10%福爾馬林緩沖液）固定的冷凍、振動和石蠟切片，b）通過免疫印跡的免疫酶標記，c）通過組織鈣視網(wǎng)膜蛋白基因敲除小鼠的免疫組織化學(6)

該產(chǎn)品是針對鈣結(jié)合蛋白D-28k和鈣調(diào)蛋白相關(guān)的EF手家族鈣結(jié)合蛋白calretinin(4)的單克隆抗體。該抗體與不同種屬組織中的鈣視網(wǎng)膜蛋白發(fā)生特異性反應(yīng)（見免疫印跡）。該抗體不與鈣結(jié)合蛋白D-28k或其他已知的鈣結(jié)合蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)，通過其在腦中的分布以及免疫印跡測定。Calretinin是一種有吸引力的神經(jīng)解剖學工具，這種McAB保證了抗Calretinin抗體持續(xù)產(chǎn)生具有相同特異性和化學同一性的恒定滴度。該抗體可識別人間皮瘤中的鈣視網(wǎng)膜蛋白(4,5)。

儲存條件：

復(fù)溶后，以小份（例如1µl）冷凍并保持在-80 ℃（或至少-20 ℃）。連續(xù)使用時，保持在4 ℃（含0.01%疊氮化納）。避免反復(fù)凍融。

腦提取物的免疫印跡

抗體6B3可特異性染色腦提取物免疫印跡上的鈣視網(wǎng)膜蛋白條帶（圖1）。

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鈣視網(wǎng)膜蛋白基因敲除小鼠的免疫組織化學

抗體6B3免疫標記正常大腦中的神經(jīng)元亞群，具有高效率（圖2a），但不染色鈣視網(wǎng)膜蛋白基因敲除小鼠的大腦（圖2b）。

工作稀釋液：

免疫組織化學：當在冷凍切片機或多聚甲醛(4%)或福爾馬林固定組織的石蠟切片上進行時，為1:2'000-1:5'000。

免疫印跡：1:1'000-1:2'000。

對于免疫組織化學和免疫印跡，采用抗生物素蛋白-生物素法測定滴度。我們建議通過滴定實驗確定宜稀釋度

參考文獻

1. Schwaller B.,Buchwald P.,Blümcke I.,Celio M.R. and Hunziker W.(1994)Characterization of apolyclonal antiserum against the purified human recombinant calcium-binding protein calretinin.Cell Calcium 14:639-648.
2. Zimmermann,L. and Schwaller B(2002)單克隆抗體識別鈣視網(wǎng)膜蛋白的表位。細胞鈣31:13-25。
3. Rogers J.H.(1987)Calretinin：一種主要在神經(jīng)元中表達的新型鈣結(jié)合蛋白的基因。J.細胞生物學105:1343-1353.
4. Gotzos V.、Vogt P.和M.R. Celio(1995)Calretinin是上皮型惡性胸膜間皮瘤的選擇性標志物。病理學研究實踐192:137-147.
5. Doglioni,C. et al.(1996)Calretinin：間皮瘤的一種新型免疫細胞化學標記物。Am.J. Surg.病理學。20:1037-1046.
6. Schiffmann S.N. et al(1999)在缺乏鈣視網(wǎng)膜蛋白的小鼠中運動協(xié)調(diào)和浦肯野細胞興奮性受損。PNAS,96:5257-5262.