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液相色譜的發(fā)展歷程

閱讀:1121      發(fā)布時間:2011-6-27
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   1960年代,由于氣相色譜對高沸點有機物分析的局限性,為了分離蛋白質、核酸等不易氣化的大分子物質,氣相色譜的理論和方法被重新引入經(jīng)典液相色譜。1960年代末科克蘭(Kirkland)、哈伯、荷瓦斯(Horvath)、莆黑斯、里普斯克等人開發(fā)了世界上*臺液相色譜儀,開啟了液相色譜的時代。液相色譜使用粒徑更細的固定相填充色譜柱,提高色譜柱的塔板數(shù),以高壓驅動流動相,使得經(jīng)典液相色譜需要數(shù)日乃至數(shù)月完成的分離工作得以在幾個小時甚至幾十分鐘內完成。

  1971年科克蘭等人出版了《液相色譜的現(xiàn)代實踐》一書,標志著液相色譜法(HPLC)正式建立。在此后的時間里,液相色譜成為zui為常用的分離和檢測手段,在有機化學、生物化學、醫(yī)學、藥物開發(fā)與檢測、化工、食品科學、環(huán)境監(jiān)測、商檢和法檢等方面都有廣泛的應用。液相色譜同時還極大的刺激了固定相材料、檢測技術、數(shù)據(jù)處理技術以及色譜理論的發(fā)展。

  1960年代前,使用的填充粒大于100μm,提高柱效面臨著困境,后來的研究人員便采用微粒固定相來突破著一瓶頸??瓶颂m、荷瓦斯制備成功薄殼型固定相,這種在固定相在玻璃微球表面具有多孔薄殼,實現(xiàn)了高速傳質,為液相色譜技術的發(fā)展奠定了穩(wěn)固的基礎。隨著填料粒徑的降低,更高的柱效也得以實現(xiàn)。1960年代研制出氣動放大泵、注射泵及低流量往復式柱塞泵,但后者的脈沖信號很大,難以滿足液相色譜的要求。1970年代,往復式雙柱塞恒流泵,解決了這一問題。1970年代后科克蘭制備出全多孔球形硅膠,平均粒徑只有7μm,具有*的柱效,并逐漸取代了無定形微粒硅膠。之后又制造出的鍵合固定相使柱的穩(wěn)定性大為提高,多次使用成為可能。1970年后,適合分離生物大分子的填料又成為研究的熱點。1980年后,改善分離的選擇性成為色譜工作者的主要問題,人們越來越認識到改變流動相的組成事提高選擇性的關鍵。

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