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組織勻漿的制備方法簡(jiǎn)介
閱讀：1730 發(fā)布時(shí)間：2023-8-9
1、取組織塊（0.2g~1g）最少可到2～5mg，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱重，放入5或10ml的小燒杯內(nèi)
2、用移液管量取預(yù)冷的勻漿介質(zhì)（ph7.4,0.01mol/L Tris-HCL, 0.0001MOL/LEDTA-2Na,0.01mol/L蔗糖0.8％的氯化鈉溶液）或者用0.86％冷生理鹽水，勻漿介質(zhì)或生理鹽水的體積總量應(yīng)該是組織塊重量的9倍，用移液管或移液器取總量的2/3的勻漿介質(zhì)或生理鹽水于燒杯中，用眼科小剪盡快剪碎組織塊（天然時(shí)操作要在冰水浴中進(jìn)行，將盛有組織的小燒杯放入冰水中）。
3、勻漿的方式有多種：手工勻漿、機(jī)器勻漿、超聲勻漿、反復(fù)凍融。
手工勻漿：將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中，再將剩余的1/3勻漿介質(zhì)或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊，一起倒入勻漿管中進(jìn)行勻漿，左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手將搗桿垂直插入套管中，上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨數(shù)十次（6～8分鐘），充分研碎，使組織勻漿化。
手工勻漿：將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中，再將剩余的1/3勻漿介質(zhì)或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊，一起倒入勻漿管中進(jìn)行勻漿，左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手將搗桿垂直插入套管中，上下轉(zhuǎn)動(dòng)研磨數(shù)十次（6～8分鐘），充分研碎，使組織勻漿化。
機(jī)器勻漿：用組織研磨機(jī)（OMNIBead Ruptor 24 多樣品研磨珠均質(zhì)儀） 6m/s研磨制成10％組織勻漿，也可用內(nèi)切式組織勻漿機(jī)制備(Omni Prep 多樣品均質(zhì)儀 )勻漿時(shí)間20秒/次，間隙10秒，連續(xù)3-5次。
超聲粉碎：用超聲波細(xì)胞破碎儀(OMNI Sonic Ruptor400W)進(jìn)行破碎，可用以振幅12.7mm超聲處理30秒使細(xì)胞破碎.
超聲粉碎：用超聲波細(xì)胞破碎儀(OMNI Sonic Ruptor400W)進(jìn)行破碎，可用以振幅12.7mm超聲處理30秒使細(xì)胞破碎.
反復(fù)凍融：培養(yǎng)或者分離的細(xì)胞可以用以上的方法勻漿，也可以反復(fù)凍溶3次左右（即讓細(xì)胞加適量的低滲液或者雙蒸水放低溫冰箱中結(jié)冰，溶解，再結(jié)冰，再溶解，反復(fù)3次左右），但有部分酶活力會(huì)受影響。
取少量組織勻漿做涂片（直接涂片、染色均可），顯微鏡下觀察細(xì)胞是否磨破，若沒(méi)有破則可以延長(zhǎng)勻漿時(shí)間或增加凍融次數(shù)。
取少量組織勻漿做涂片（直接涂片、染色均可），顯微鏡下觀察細(xì)胞是否磨破，若沒(méi)有破則可以延長(zhǎng)勻漿時(shí)間或增加凍融次數(shù)。
4、將制備好的10％勻漿用普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)3000r/min左右離心10～15分鐘，若檢測(cè)ATP酶，則只需要1000轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘，將離心好的勻漿留下上清棄下面沉淀。
根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要，取適量上清夜進(jìn)行各種測(cè)定。
根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)需要，取適量上清夜進(jìn)行各種測(cè)定。