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多功能酶標(biāo)儀靈敏度影響因素探究
現(xiàn)在，多功能酶標(biāo)儀基本上是每個(gè)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的基礎(chǔ)科研設(shè)備。市場(chǎng)上多功能酶標(biāo)儀品牌主要有Bio-Tek、BMG、MD、PE、Tecan等。每個(gè)品牌都有自己的特色和優(yōu)勢(shì)產(chǎn)品。而各品牌廠家在對(duì)自己產(chǎn)品性能－比如說(shuō)檢測(cè)靈敏度的描述時(shí)，除了表征光吸收值的OD值參數(shù)外，像熒光檢測(cè)靈敏度、發(fā)光檢測(cè)靈敏度等，卻往往沒(méi)有一個(gè)統(tǒng)一的方式和定義（名稱等）。這對(duì)用戶在選購(gòu)酶標(biāo)儀時(shí)進(jìn)行儀器間性能的對(duì)比會(huì)帶來(lái)一定的困惑。我們來(lái)看看市場(chǎng)上的優(yōu)勢(shì)品牌在對(duì)熒光檢測(cè)靈敏度這一參數(shù)的不同的描述： |
，對(duì)于靈敏度的描述，主要有“Sensitivity"和“Detection Limit"兩種說(shuō)法,我們分別來(lái)看它們的定義： |
1.分析方法的檢出限：國(guó)際理論與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(huì)（IUPAC）對(duì)檢出限的規(guī)定：對(duì)各種光學(xué)分析方法，可測(cè)量的最小分析信號(hào)XL以下式表示：
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2.儀器檢出限：用于評(píng)價(jià)儀器的檢測(cè)能量，即：相對(duì)應(yīng)背景，儀器可靠檢測(cè)的最小信號(hào)，通常用信噪比S/N來(lái)表示，為S/N≥K,根據(jù)置信度概念，K可取2或3，為合理的賦予值。 B: Sensitivity：靈敏度。對(duì)于靈敏度概念而言，在IUPAC的定義是：方法的靈敏度m表示被測(cè)組分濃度或含量改變一個(gè)單位時(shí)所引起的分析信號(hào)的變化，即m=dX/dc。其中X為分析信號(hào)，c為濃度或含量。在分析方法的校正曲線上，一般可以認(rèn)為靈敏度就是分析校正曲線的斜率。曲線斜率越大，表示靈敏度越高。但在儀器參數(shù)中所說(shuō)的“Sensitivity"并不是表示這一概念，而是具體指的是“DL（Detection Limit）或LOD（Limit Of Detection）"，比如BMG在Sensitivity的注解中就明確說(shuō)明指的是“LOD"。如果上述（表中）參數(shù)描述的“Detection Limit"（Tecan/MD/PE）指的是“方法檢出限"且“Sensitivity"(BMG/Bio-Tek/Thermo)指的是“LOD"時(shí)，則Sensitivity＝LOD＝DL＝Detection Limit。雖然描述詞不同，但是概念是相同的，其參數(shù)可以直接比較。 |
目前從各廠家公開的資料中，只有BMG明確說(shuō)明采用國(guó)際理論與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(huì)（IUPAC）的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)去例明參數(shù)。也只有BMG公司在參數(shù)中明確寫明了其Sensitivity的定義，包括定義、詳細(xì)的測(cè)定條件等。例如在BMG最新推遲的高性能漸變?yōu)V片型光柵多功能酶標(biāo)儀CLARIOstar的參數(shù)描述中，其FI（熒光）頂讀的靈敏度為FI Filters (top) < 0.4 pM (< 8 amol/well Fluorescein, 384sv, 20 μL)，就在參數(shù)后面明確寫明了測(cè)試靈敏度時(shí)的方法：采用熒光素（Fluorescein）為底物做6點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，采用的是384 Small Volume微孔板，20μL的檢測(cè)體系。這里要清楚知道，測(cè)定參數(shù)時(shí)采用的微孔板類型以及檢測(cè)體系的體積非常重要。因?yàn)椴煌臈l件，其靈敏度計(jì)算結(jié)果是不一樣的。下面表2為各酶標(biāo)儀廠家的網(wǎng)站的參數(shù)資料： |
每個(gè)廠家都有不同的標(biāo)準(zhǔn)去定出其檢測(cè)靈敏度。一般會(huì)把所用的檢測(cè)濃度和質(zhì)量寫出來(lái)，但也有些廠家或型號(hào)只例出濃度單位，例如：Bio-Tek Neo，MD SpectraMax M5/M3等。要全面比較檢測(cè)靈敏度，其實(shí)要配合濃度、質(zhì)量和檢測(cè)體積幾個(gè)要數(shù)作考慮。如果只有濃度(M)，那實(shí)際檢測(cè)的體積是多少?200μl?100μl或是20μl?不同的體積會(huì)使實(shí)際檢測(cè)的質(zhì)量不同，這可以是十倍或更多的差別。 綜合以上各方面，在對(duì)酶標(biāo)儀的參數(shù)進(jìn)行對(duì)比時(shí)，單位的統(tǒng)一非常重要，同時(shí)測(cè)定參數(shù)時(shí)采用的條件同樣重要。對(duì)于眾多廠家的儀器，其實(shí)很難用一個(gè) 一樣的方法去比較，因?yàn)椴煌瑥S家所用的條件都不一樣。畢竟儀器的性能和表現(xiàn)是要用家使用出來(lái)，而不只是靠把參數(shù)寫得漂亮。 |