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選購(gòu)國(guó)產(chǎn)PCR儀時(shí)需要考慮的因素
PCR儀作為分子生物學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)的常規(guī)儀器，每年都有數(shù)千臺(tái)的選購(gòu)量，這兩年一批國(guó)產(chǎn)PCR儀正在興起。購(gòu)買國(guó)產(chǎn)PCR儀需要考慮以下因素：
1、樣本管的種類
現(xiàn)在主要有0.2ml和0.5ml兩種，使用0.5ml PCR管的人員已經(jīng)很少了，一是0.5ml PCR專用的薄壁管很少見(jiàn)，二是如果想要較大體積的PCR產(chǎn)物，可以通過(guò)多分幾個(gè)0.2ml PCR管來(lái)實(shí)現(xiàn)。除非經(jīng)常需要較大體積的PCR產(chǎn)物，否則可以不必考慮0.5ml型的PCR儀。
2、樣本容量
種類很多，0.2ml的有96孔和48孔，0.5ml的有60孔和30孔，384孔等，當(dāng)然還有一些其他組合：如0.2ml的48孔與0.5ml的30孔組合。購(gòu)買96孔的還是48孔的PCR儀主要從經(jīng)濟(jì)上考慮，當(dāng)然現(xiàn)在很多的廠家都有雙48孔的產(chǎn)品，可以當(dāng)兩臺(tái)48孔的PCR儀使用，也是一個(gè)比較好的選擇，但48孔的PCR儀大都沒(méi)有梯度功能。
一般來(lái)講384孔都是用384孔的，對(duì)封膜的要求比較高，一定要采用專門用于PCR反應(yīng)的膜，普通封板膜會(huì)影響PCR反應(yīng)，造成實(shí)驗(yàn)失敗。還有一些特別的PCR儀，如用于原位PCR的。
3、溫度梯度功能
即不同列或不同行之間溫度可以為不同的溫度。這一功能對(duì)于固定PCR程序的檢驗(yàn)人員來(lái)講，可能用處不大，但對(duì)于經(jīng)常進(jìn)行不同基因擴(kuò)增的研究人員來(lái)講可以說(shuō)是必須的。因?yàn)榇蠹叶贾繮CR反應(yīng)的復(fù)性溫度是PCR成功的要素，PCR復(fù)性溫度只有通過(guò)溫度梯度實(shí)驗(yàn)來(lái)選擇才是適宜的，你可以通過(guò)溫度梯度實(shí)驗(yàn)了解到實(shí)驗(yàn)成功的復(fù)性溫度范圍，選擇中間的一個(gè)溫度點(diǎn)來(lái)保證實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性。朗基T20、T30 PCR儀就屬于這一類。
通過(guò)理論計(jì)算得到的復(fù)性溫度可以作為溫度梯度實(shí)驗(yàn)的中心點(diǎn)來(lái)使用，如果認(rèn)為這一溫度就是好的復(fù)性溫度則是錯(cuò)誤的。因?yàn)閺?fù)性的溫度與緩沖液中的離子強(qiáng)度、DMSO的含量、Mg2+離子的濃度等都有直接關(guān)系，而研究人員一般并不了解所用的緩沖液中這些因素的含量或是在計(jì)算時(shí)都采用了缺省值。
另外，假設(shè)理論計(jì)算是正確的，但PCR儀的溫度還有準(zhǔn)確性和精確性的問(wèn)題，一般都在±0.3至±0.5，也會(huì)影響到實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性，通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定復(fù)性溫度可以解決儀器準(zhǔn)確性問(wèn)題。這也是有些實(shí)驗(yàn)在一臺(tái)儀器上做得很好，換一臺(tái)儀器就不好的一個(gè)原因。當(dāng)然溫度梯度功能也可用于變性溫度等的優(yōu)化。