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技術(shù)文章

洗板時應(yīng)注意以下問題

閱讀:2338          發(fā)布時間:2016-6-15

洗板目的在于將特異性結(jié)合于固相上的抗原(抗體)與溫育過程中吸附的非特異性成份分離,使免疫復(fù)合物與待測抗體(抗原)呈一定比例洗板是否合格直接影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。洗板應(yīng)嚴(yán)格按照說明控制洗板時間及洗板次數(shù),ELISA 檢測一般用洗滌液洗板3 ,洗滌液應(yīng)嚴(yán)格按照操作說明進(jìn)行稀釋, 洗液應(yīng)注滿每個微孔并注意洗液不外溢,垂直甩板避免交叉污染,防止出現(xiàn)假陰性及假陽性結(jié)果。使用洗板機(jī)洗板可一定程度上避免環(huán)境污染、提高工作效率洗滌開始時注意觀察每根吸液針是否一直插入孔底并吸干孔內(nèi)全部液體, 嚴(yán)格按照要求設(shè)置一定的洗板時間及洗板次數(shù)洗板過程中注意沖力大小,避免沖力過大導(dǎo)致酶結(jié)合物丟失吸光度值偏低。洗液應(yīng)根據(jù)不同廠家的酶標(biāo)板調(diào)整注水量注意不要溢出孔外; 稀釋洗液所用的蒸餾水或去離子水酸堿度適中,使配出的洗液pH 7.2~7.6 范圍內(nèi)用非金屬容器保存,保持液體新鮮無污染沉淀。洗板結(jié)束后將板拍干, 應(yīng)垂直扣在備好的干凈的吸水紙或毛巾上,且注意每次更新干凈的吸水紙或毛巾。

洗板時還應(yīng)注意以下問題

(1) 需每天校正注液量及殘液量洗滌后殘液量不得大于2μl;

(2)及時更換破損吸液針避免破壞底板包被;

(3)針對不同廠家酶標(biāo)板注意調(diào)整吸液頭下降高度避免沖洗針頭卡住酶標(biāo)板;

(4)注意調(diào)整洗液量,洗液量過多將溢出過少將達(dá)不到洗滌效果;

(5)關(guān)機(jī)前使用蒸餾水沖洗管道,避免洗液的結(jié)晶物堵塞管道;

(6)不同種試劑盒的洗液嚴(yán)禁混合使用臨床操作中, 工作人員由于擔(dān)心洗板次數(shù)過少達(dá)不到去除非特異性物質(zhì)的理想效果而增加洗板次數(shù),zui近研究發(fā)現(xiàn)隨著洗板次數(shù)的增加樣本檢測的OD 值降低,造成假陰性結(jié)果及灰區(qū)標(biāo)本的漏檢

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