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温育是ELISA测定中影响测定成败zui为关键的一个因素。ELISA实验作为一种固相免疫测定，抗原抗体的结合反应在固相上进行，要使液相中的抗原或抗体与固相上的特异抗体或抗原*结合，必须在一定的温度条件下反应一定的时间。温育所需时间与温度成反比，即温度越高，则所需时间相对较短。在ELISA中一般有两次抗原抗体反应，即加标本和加酶结合物后?？乖固宸从Φ耐瓿尚枰幸欢ǖ奈露群褪奔洌庖槐Ｎ鹿坛莆掠?incubation)，也被称之为孵育。这是一个逐步平衡的过程，因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的酶标记抗体与固相抗原的结合也同样如此。

　　温育常采用的温度有43℃、37℃、室温和4℃（冰箱温度）等。37℃是实验室中常用的保温温度，也是大多数抗原抗体结合的合适温度。实验表明，两次抗原抗体反应一般在37℃经1-2小时，产物的生成可达。为加速反应，可提高反应的温度，有些试验在43℃进行，但不宜采用更高的温度。抗原抗体反应4℃更为*，在放射免疫测定中多使反应在冰箱中放置一晚上，以形成zui多的沉淀。但因所需时间太长，在ELISA中一般不予采用。