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上海恒远生物科技有限公司>技术文章>请放心购买“人一氧化氮合成酶ELISA试剂盒”

技术文章

请放心购买“人一氧化氮合成酶ELISA试剂盒”

阅读:1029          发布时间:2015-10-28

十年沉淀,参考信息日益完善,操作流程方便易学,在科研界奠定了坚实的实验基础??蒲腥嗽辈欢锨毙难蟹ⅲ貌慰际翟嚼丛?,减少实验误差。现货供应,。满足行业的不同需求,针对不同客户的实验要求制定不同的使用方案。随着国内生物科研领域的发展,在未来的几年ELISA试剂盒的需求会更多。

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检测范围:  96T

1μmol/L - 32μmol/L

使用目的:

本试剂用于测定人血清、血浆及相关液体样本中一氧化氮合成酶 (NOS)含量。实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人一氧化氮合成酶 (NOS)水平。用纯化的人一氧化氮合成酶(NOS)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入一氧化氮合成酶(NOS),再与 HRP标记的一氧化氮合成酶 (NOS)抗体结合,形成抗体 -抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物 TMB显色。TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的一氧化氮合成酶(NOS)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人一氧化氮合成酶(NOS)浓度。

试剂盒组成

1

30倍浓缩洗涤液

20ml×1瓶

7

终止液

6ml×1瓶

2

酶标试剂

6ml×1瓶

8

标准品( 64μmol/L)

0.5ml×1瓶

3

酶标包被板

12孔 × 8条

9

标准品稀释液

1.5ml×1瓶

4

样品稀释液

6ml×1瓶

10

说明书

1份

5

显色剂 A液

6ml×1瓶

11

封板膜

2张

6

显色剂 B液

6ml×1/瓶

12

密封袋

1个


标本要求

1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于 -20℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品,因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的( HRP)活性。操作步骤

1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、

待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为 5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

3.温育:用封板膜封板后置 37℃温育 3 0分钟。

4.配液:将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30倍稀释后备用

5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30秒后弃去,如此重复 5次,拍干。

6.加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。

7.温育:操作同 3。

8.洗涤:操作同 5。

9.显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀, 37℃避光显色15分钟.

10.终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

11.测定:以空白空调零, 450nm波长依序测量各孔的吸光度( OD值)。测定应在加终止

32μmol/L

5号标准品

150μl的原倍标准品加入 150μl标准品稀释液

16μmol/L

4号标准品

150μl的 5号标准品加入 150μl标准品稀释液

8μmol/L

3号标准品

150μl的 4号标准品加入 150μl标准品稀释液

4μmol/L

2号标准品

150μl的 3号标准品加入 150μl标准品稀释液

2μmol/L

1号标准品

150μl的 2号标准品加入 150μl标准品稀释液

液后 15分钟以内进行。操作程序总结:

计算

以标准物的浓度为横坐标, OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在 5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。

4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD值大于标准品孔*孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数( n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .

8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。保存条件及有效期

1.试剂盒保存:;2-8℃。

2.有效期: 6个月

标本收集方法:
1. 血清:
室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
2. 血浆:
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
3. 尿液:
用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4. 细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。
5. 培养细胞
    检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
6. 组织标本
    切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

人一氧化氮合成酶(NOS)elisa试剂盒   48次 1200元,96次,2200元,本公司提供免费代测服务,详情请咨询

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