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罗丹明123染色步骤解析
阅读：15905 发布时间：2015-7-21上海恒远生物供应的荧光染料罗丹明123（Rh123）是一种可对活细胞线粒体染色的细胞染色试剂。Rh123可透过细胞膜且在活细胞的线粒体内聚集，并发出黄绿色荧光。Rh123用于对许多种细胞进行染色，包括植物细胞和细菌。由于细胞内ATP的量与Rh123的荧光强度之间有相关性，此荧光染料被应用于检测细胞内的ATP。Rh123还用于癌症研究。
Rhodamine 123 染色
中文名称：罗丹明 123
目 的：测细胞内线粒体的跨膜电位
EX/EM： 505/534
染液配制： 罗丹明123 粉剂用甲醇配制成1mg/ml的储备液，100ul/支分装，-20℃保存。染色时用Dulbecco’s PBS缓冲液将其稀释为5ug/ml。
说明：激光染料，生物染色。
别名：；2-(6-Amino-3-imino-3H-xanthen-9-
yl)benzoic acid methyl ester
外观：红色至棕色粉末溶解性：溶于水。溶于乙醇，参考浓度1mg/ml。
英文名：Rhodamine
是一种荧光染
说明：激光染料，生物染色。
别名：；2-(6-Amino-3-imino-3H-xanthen-9-
yl)benzoic acid methyl ester
外观：红色至棕色粉末
溶解性：溶于水。溶于乙醇，参考浓度1mg/ml。
英文名：Rhodamine
是一种荧光染料，邻苯二酚类料，邻苯二酚类
染色步骤：
培养细胞
Dulbecco’s PBS缓冲液漂洗2～3次(缓冲液预热至室温或37℃)
Rhodamine 123(5ug/ml) 37℃孵育1小时
Dulbecco’s PBS缓冲液漂洗2～3次
加0.5ml Dulbecco’s PBS，上机测量
Fluo-3-AM 染色 (测细胞内游离钙离子浓度)
原理：
AM酯的羧酸经修改不带电荷，易浸入细胞。一旦进入细胞，亲脂性集团被非特异酯酶切断，使其带电荷，从而溢出细胞大大减慢。一般，酯化集团水解对于结合靶离子是必须的。AM酯水解显颜色或荧光的特点可用于检查其自发水解。
保存：
指示剂干燥避光4℃或-20℃可长期保存。
AM酯易水解，发货瓶中至少可放六个月。
用时AM应溶解于无水DMSO，并尽快使用（一周内），否则细胞运载能力下降。AM的DMSO储备液应避光、冷冻、干燥保存。盐的储备液应用蒸馏水或缓冲液制备，冷冻-20℃避光保存，可放6个月。
应用：
用细胞浸透AM酯运载技术：
1.在生理缓冲媒介中将DMSO稀释至1-5μM。不可用含胺的缓冲液如Tris。
2.有机阴离子转运抑制剂苯甲酸（1－2.5mM）或sulfinpyrazone(0.1-0.25mM)可加入细胞外液以减少指示剂去酯后的渗漏。苯甲酸和sulfinpyrazone是很碱性的，所以之后要重调pH值。
3.AM酯孵育细胞一般在20－37℃，15－60分钟，准确的浓度，时间和温度靠经验摸索。AM酯运载技术有一个内在问题即亚细胞隔阂，降低孵育温度可以减轻这一副作用。
4.检测荧光前，建议细胞在无指示剂媒介中（有阴离子转运抑制剂）洗，以去掉细胞表面的非特异吸附的染料。而后再孵育30分钟来进一步使细胞内AM酯*脱掉。荧光素泄漏引起的背景高可以在实验前在细胞外加入抗荧光素抗体来防止。
目 的：测细胞内游离钙离子浓度
EX/EM：探针在细胞外液无荧光，进入细胞后zui大激发波长和发射波长为464/526
方法一：
染液配制：Fluo-3-AM 50ug溶于45ul DMSO(Fluo-3-AM浓度 1mM)，15ul/支分装，-20℃保存。染色时用15～50mM HEPES缓冲液将其稀释为1～20uM(如1.5ml 为10uM)。
染色步骤：
培养细胞
缓冲液漂洗2～3次
Fluo-3-AM (1～20uM) 37℃或室温孵育0.5～1小时
缓冲液漂洗2～3次
加0.5ml 缓冲液，上机测量
上海恒远供应产品参数：罗丹明123 1 WinID:0UNV 中文名称:罗丹明123 英文名称:Rhodamine 123 别名名称:2-(6-Amino-3-imino-3H-xanthen-9-yl)benzoic acid methyl ester