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细胞裂解液样本及组织匀浆样本的正确采集方法
阅读：7695 发布时间：2015-6-16通常我们可用于ELISA检测的样本是有多种类型的，如血清、血浆、尿液、细胞培养上清或组织匀浆液等，不同类型的检测样本前期的处理方法是不一样的。正确的处理样本是保证ELISA检测的正确性和准确性的*步，下面简单介绍一下细胞裂解液样本及组织匀浆样本的正确采集、处理方法。
细胞裂解液
1) 吸去培养板内的培养基，用胰酶消化细胞，加适量培养基将细胞从培养板上吹下来。悬浮细胞可省略。
2) 收集细胞悬液，1000×g离心10min，弃去培养基，用预冷的PBS润洗3次。
3) 加入适量的预冷PBS或细胞裂解液（临用前加入蛋白酶抑制剂）重悬细胞。通常6孔板一个孔的细胞量需要150~250μL PBS重悬。
4) 将样品放入-20℃或-80℃，使样品冷冻，再放室温解冻样品，反复冻融几次，使细胞充分裂解。也可将样品进行超声破碎，以达到裂解的目的。
5) 4℃10000×g 离心10min，除去细胞碎片，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
组织匀浆液
1) 将组织样本用PBS (0.01M, PH 7.4) 冲洗，洗去组织表面残留的血液或杂质。
2) 将组织块称重，记录后剪碎，碎块应尽量小，便于匀浆得更充分。
3) 将组织按一定的比例加入预冷的PBS（临用前加入蛋白酶抑制剂）匀浆，匀浆时置于冰上或冰浴中。（通常按组织重量：PBS体积=1:9的比例匀浆，例如1g的组织样本对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，检测后计算样品浓度时应乘以相应的稀释倍数）。
4) 吸取匀浆液到离心管，4℃5000×g 离心5~10min，取上清，-20℃或-80℃保存，避免反复冻融。
注意：保证样本不含NaN3，因为NaN3会抑制HRP的活性，从而导致假阴性的结果。