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上海恒远生物科技有限公司>技术文章>猪瘟抗体ELISA实验操作要领

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猪瘟抗体ELISA实验操作要领

阅读:1253          发布时间:2015-3-30

山东农业大学的赵老师于去年12月在我公司代测猪瘟抗体,白介素,干扰素等相关系列21个指标的ELISA实验现需发表文献特我公司关于猪瘟抗体等实验的详细操作流程,我司技术做出如下详细解答

1.用包被液将猪瘟弱毒单抗纯化联抗原、猪瘟强毒单抗纯化酶联抗原各做100倍稀释,每孔包被100μl,4湿盒放置一夜。
2.次日取出,甩去孔内液体,3×3′冲洗。
3.将待检血清以PBS液做400倍稀释,每孔加100μl同时将猪瘟阳性血清、猪瘟阴性血清各做100倍稀释,于对照孔中加100μl。37温育1.5h2h
4.重复第二步,取出,甩去孔内液体,3×3′洗涤。
5.将兔抗猪IgG酶标抗体以PBS液做100倍稀释,每孔加100μl,37温育1.5h2h。
6.重复第4步。
7.每孔加底物溶液100μl,室温下观察显色反应。当阴性对照孔稍显色时,立即终止反应,并以阴性孔做空白对照。
8.每孔加终止液50μl立即于酶联免疫吸附检测仪测定490nm波长的光密度。
(三)结果判定
在猪瘟弱毒酶联板上,OD≥0.2,为猪瘟弱毒抗体阳性;OD0.2,为猪瘟弱毒抗体阴性。
在猪瘟强毒酶联板上,OD≥0.5,为猪瘟强毒抗体阳性;OD0.2,为猪瘟强毒抗体阴性。

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