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ELISA酶联免疫吸附实验之竞争法测抗体
阅读：2549 发布时间：2013-12-18酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）是将抗原抗体反应的特异性和酶的催化作用相结合而发展起来的一种免疫标记技术，既可用于组织、细胞内抗原的检测，又可用于体 液中抗原抗体的检测。根据检测方法的不同，可将酶联法分为双抗体夹心法、间接法、竞争法、捕获法和其他ELISA，今天就让恒远来为您讲解ELISA酶联免疫吸附实验之竞争法。
竞争法
既可用于抗原半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。以抗原竞争法为例，将已知抗体吸附于固相载体，加一定量已知酶标抗原及待测抗原，使两者 竞争与固相抗体结合，经洗涤，zui后结合于固相抗体上的酶标抗原与待测抗原含量呈负相关。步骤如下：
（1）已知抗体包被酶标板，4℃隔夜。
（2）测定管内加一定量酶标抗原和待检样品，对照管内只加相同量酶标抗原。温育，洗涤。
（3）分别于测定管、对照管内加一定量底物显色。
（4）用酶标仪测定对照管、测定管内OD值，用空白调零。通过对照管与测定管OD值之 差，计算标本中待测抗原含量。
进行ELISA操作时应注意以下几点：
①实验室温度应控制在18℃～25℃；
②加样须准确，同一样本设立对照管、测定管各两孔，取其平均值；
③严格控制温 育反应温度及时间，洗涤应充分；
④ 结果判定应以仪器为准，肉眼仅作参考。
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