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細(xì)胞凋亡的檢測方法
閱讀：1442 發(fā)布時間：2013-7-12細(xì)胞凋亡也就是實驗中常說的程序性細(xì)胞死亡，它是一種不同于壞死的由基因調(diào)控的細(xì)胞主動性死亡過程，是細(xì)胞在一定的生理或病理狀態(tài)下，遵循自身的程序，自己結(jié)束自己生命的過程，zui后細(xì)胞脫落離體或裂解為若干凋亡小體，而被其他細(xì)胞吞噬。
檢測細(xì)胞凋亡的方法：
光學(xué)顯微鏡檢查：
細(xì)胞涂片或組織切片在PAS或HE染色后，即可在油鏡下觀察，若同時進(jìn)行細(xì)胞免疫組化研究，則可判別AP細(xì)胞種類。
判斷標(biāo)準(zhǔn)：
①散在單個細(xì)胞。
②細(xì)胞體積縮小。
③輪廓清楚，常有一環(huán)形的空白區(qū)，胞漿嗜酸性。
④核濃縮，邊聚碎裂呈分散的嗜堿性塊。
⑤胞內(nèi)凋亡小體。
⑥無炎癥反應(yīng)。
電子顯微鏡檢查
電鏡是觀察細(xì)胞形態(tài)的方法。細(xì)胞核和細(xì)胞器亞微結(jié)構(gòu)清晰易辨，尤其是電子顯微鏡與數(shù)字圖形處理系統(tǒng)結(jié)合可觀察到超微結(jié)構(gòu)更細(xì)微的變化。雖然光學(xué)顯微鏡下可以看見胞膜起泡現(xiàn)象和凋亡小體，但凋亡細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化大多發(fā)生在超微結(jié)構(gòu)，因此用光鏡觀察難以令人滿意，而透射電鏡可清楚地觀察到細(xì)胞結(jié)構(gòu)在凋亡不同時期的變化。電鏡形態(tài)學(xué)觀察是迄今為止判斷凋亡zui經(jīng)典、zui可靠的方法，被認(rèn)為是確定細(xì)胞凋亡的金標(biāo)準(zhǔn)。Ap過程的重要變化是細(xì)胞染色體的碎片狀分解，細(xì)胞器變化和生物膜呈空泡狀。電鏡標(biāo)本的制備同常規(guī)處理，電鏡下可見Ap細(xì)胞體積縮小，小體積細(xì)胞比例增高。細(xì)胞表面纖毛喪失，細(xì)胞核沿核膜內(nèi)側(cè)邊緣開始固縮，電子密度升高。在初期細(xì)胞器仍保持完整。掃描電鏡下Ab小體的表面生物膜形成大量氣泡和空泡，呈沸騰狀和凹陷狀變化；透射電鏡下則呈圓形結(jié)構(gòu)，內(nèi)含多個或整個細(xì)胞器，也可含一部分細(xì)胞核。