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    一、添加剂的添加
    1.温度的掌握：卵黄和抗生素类添加的温度都不应太高。
    2.定量：过多会抑制一些目标菌，太少又导致杂菌的过度生长。

    二、培养温度的掌握
    1.真菌类：25-28℃培养
    2.细菌类：李氏菌在增菌和生化中要求培养温度在30℃左右。
    3.其他一般在36℃左右

    三、接种方法
    常用的方法主要有划线、三点接种、穿刺接种、倾注接种、涂布接种、液体接种。

    四、革兰氏染色方法
    染色时间的掌握、冲洗的方法

    五、划线获得单个菌落的方法，划不出单个菌落的原因
    1.平板上有过多的水分；
    2.划线时接种环未经反复灼烧。
    3.多区划线，三区或四区划线。

    六、涂布和倾注的区别
    1.涂布利于观察，但由于涂布棒上会带有少量的菌液，影响计数的准确性。
    2.涂布更为准确，但不利于观察菌落的状态。

    七、培养基配制时应注意的问题
    1.灭菌温度要严格控制，按照要求灭菌，尤其含糖量较高的培养基温度不应太高，过高会导致糖分焦化，影响质量。
    2.琼脂培养基不能反复溶化。反复溶化会破坏培养基中的营养成分。
    3.培养基不能反复灭菌，反复灭菌也会导致营养成分的破坏。
    4.含琼脂的培养基灭菌后，要摇匀。

    八、板的保存
    大多数平板如VRBA、DC、尿素酶生化管、显色系列等要避光低温保存。

    九、产品的保存
    1.干粉培养基：避光干燥，结块后不能使用。
    2.亚碲酸钾卵黄增菌液、50%卵黄乳液等：冷冻保存，使用时，要常温解冻，避免水浴加热。
    3.抗生素类：冷藏保存，温度过高会导致灵敏度的下降。
    4.兔血浆：冷藏保存少量的红色不会影响结果。

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