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ELISA的标准曲线如何拟合?

阅读:6055          发布时间:2016-8-23


许多试剂检测都涉及到标准曲线的问题,标准曲线做的好与坏会直接影响到实验的结果,甚至是关系到实验的成败,那么ELISA的标准曲线如何拟合??

一般情况按照说明书推荐方法拟合标准曲线。标准曲线可以由酶标仪附带软件自动生成,也可手动制作。标准曲线呈“S”形曲线,两端趋于水平,中间趋于线性,中间部分为较佳的检测范围。当标准品的量超过与包被抗体结合的量,此时标准品已饱和,再增加标准品的量,其OD值不再变化,故当标准品达到一定浓度后,曲线就趋于水平。一般厂商给出的浓度范围落在中间线性范围,根据标准曲线,可以测出样本的浓度。按照科学分析方法,如果存在“奇异点”或者“污点”,直接采用线性分析不是很好,要对拟合标准曲线的几个点进行取舍,同时也可改用双对数直线拟合或者四因素曲线拟合。

  以标准物的浓度为纵坐标(对数坐标),OD值为横坐标(对数坐标),在对数坐标纸上绘出标准曲线。推荐使用专业制作曲线软件进行分析,如curve expert 1.3,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度,再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。


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