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恒遠(yuǎn)技術(shù)分析:elisa實(shí)驗(yàn)陰性對照需要做梯度稀釋嗎

閱讀:1602          發(fā)布時間:2015-11-11

上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司主要ELISA試劑盒,主要合作對象是學(xué)校,醫(yī)院、研究所等科研單位。學(xué)校客戶以新手為主。所以常有客戶咨詢未處理陰性對照需要做梯度稀釋嗎:以小鼠血清為例,小鼠的血清是直接拿來作為陰性對照,還是要進(jìn)行稀釋?如果要稀釋,該怎么稀釋才科學(xué)?

從理論上說,陰性對照的血清,不論稀釋多少倍,OD值都不應(yīng)該有明顯變化。有兩種可能:

1.正常小鼠本身含有該抗原的抗體;

2.ELISA過程中非特異性反應(yīng)去除不干凈,如洗板、孵育溫度時間、抗原抗體濃度等,這樣稀釋倍數(shù)越高的樣本其對結(jié)果的影響就越小,就呈現(xiàn)逐漸下降的趨勢。你的陰性孔的OD值有多少呢,正常情況應(yīng)低于0.1,不然就要優(yōu)化下整個實(shí)驗(yàn)體系了。
判斷陰陽性,以陰性O(shè)D值的2倍作為判斷標(biāo)準(zhǔn)只是根據(jù)我們一般的經(jīng)驗(yàn)而定,更科學(xué)的方法是,測定一批陰性樣品(比如20個以上),計算OD平均值及標(biāo)準(zhǔn)差,以平均值+2或3倍標(biāo)準(zhǔn)差作為陰陽性的界限。

上海恒遠(yuǎn)技術(shù)為您提供更多ELISA檢測技術(shù),為實(shí)驗(yàn)新手打開方便之門,如有疑問可致電于我司技術(shù)咨詢!

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