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技術(shù)文章

ELISA試驗(yàn)中為什么要避免產(chǎn)生氣泡

閱讀:1363          發(fā)布時(shí)間:2015-6-24

                    ELISA試驗(yàn)中為什么要避免產(chǎn)生氣泡

通常氣泡都是聚集在酶標(biāo)板的孔周圍,導(dǎo)致孔中液體不能與孔壁有效接觸,使孔內(nèi)反應(yīng)不均一。

包被時(shí)有氣泡的話,將導(dǎo)致包被不*實(shí)際包被量下降--弱陽性甚至假陰性。

封閉時(shí)有氣泡的話,將導(dǎo)致大量未結(jié)合位點(diǎn)的存在,引起非特異性結(jié)合--本底增高,假陽性。

加樣時(shí)有氣泡的話,抗原抗體不能有效的結(jié)合--弱陽性甚至假陰性。

加二抗時(shí)有氣泡的話,抗原抗體不能有效的結(jié)合--弱陽性甚至假陰性(競爭法相反----假陽性)。

加顯色液時(shí)有氣泡的話---顯色不*。

加終止液時(shí)有氣泡的話,1。不能*終止反應(yīng) 2。影響酶標(biāo)儀比色,OD值增高

洗滌時(shí)有氣泡的話,非特異性結(jié)合物不能*洗去,做無用功。


避免方法:

1。加樣時(shí)盡量靠近孔底(不要接觸孔底),用力均勻,不要過快過猛。

2。封閉時(shí)一定要加滿孔,

3。洗滌時(shí)一定要加滿孔(重要),氣泡會浮上來zui終驅(qū)除。手工洗板時(shí)一定要吸干水分并用力拍干。

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